просочують і заливають
) заливка проведена охолодженим парафіном
) недостатнє видалення спирту перед просяканням.
в) Площина зрізу нерівна, матеріал погано ріжеться або зовсім не ріжеться, ніж підскакує над поверхнею блоку.
Причина:
) перевтома матеріалу при проводці і фіксації.
Усунення:
Неможливо. Можна лише кілька розм'якшити матеріал, якщо на поверхню різання перед кожним рухом ножа наносити шар гарячого парафіну пензликом (давши йому потім охолонути) або дихати на поверхню блоку.
г) Зрізи закручуються, прилипають до поверхні ножа, мнуться.
Причини:
) малий кут нахилу ножа
) м'який парафін
) висока температура навколишнього середовища.
Усунення:
) змінити кут нахилу
) залити матеріал у більш твердий парафін і охолодити блок шляхом приміщення перед різкою в холодильник (можна також покласти на поверхню різання шматочок льоду)
) приклеювання, зморщування або розрив зрізів, особливо при різанні органів, багатих кісткової, хрящової або щільної сполучної тканини, можуть бути наслідком їх електризації.
Усунення:
поміщати на лезо (у місці проходження зрізу) краплю води, дихати на лезо і блок, натирати ділянку леза і прилеглу частину ножа шматком твердого парафіну.
е) Зрізи розриваються або покриті борознами.
Причини:
) щербини на лезі ножа
) брудний парафін (щільні смітинки дряпають зріз і псують лезо);
) матеріал погано декальцінірованний.
Усунення:
) точка і правка ножа або переміщення в ножедержателе
) перезаливка в чистий парафін
3) усунути не можна.
ж) Площина зрізу не однорідна (білувата в середній частині).
Причина:
Недостатнє зневоднення.
Усунення:
Розплавлювання блоку і проведення матеріалу через проміжні зрізи до абсолютного спирту. Після зневоднення проводять через проміжну середу, просочують і заливають.
Приготування серій парафінових зрізів
При серійному дослідженні матеріалу, залитого в парафін, найзручніше користуватися стрічками з зрізів. Однак домагатися отримання таких стрічок завжди легко. Для досягнення хороших результатів необхідно дотримуватися такі основні умови:
. Парафін повинен бути хорошої якості з температурою плавлення 48-520С, досить пластичним, а висновок матеріалу в нього бездоганним. Неможливо отримання стрічок при занадто щільних і великих об'єктах.
. Ніж повинен бути добре заточений і встановлений поперечно.
. Парафінові блоку надають строго прямокутну форму, довжині його встановлюють паралельно длиннику мікротома. Одночасно стежать за тим, щоб вузька сторона блоку, звернена до лезу ножа, була теж паралельна останньому. Ріжучий край ножа, будучи підведений до блоку, повинен прилягати до всієї його боці.
. Бажана товщина зрізів 7-8 мкм. Занадто тонкі й товсті зрізи малопридатні. Різання ведуть толчкообразним рухами ножа.
. У лабораторному приміщенні бажана температура близько 18-220С. При більш низькій температурі необхідно поставити близько мікротома (поблизу блоку) включену електроплиту. Навпаки, при дуже високій температурі парафін стає м'яким, зрізи легко мнуться, у такому випадку блок охолоджують льодом.
. У процесі різання зрізи накопичуються на верхній поверхні ножа, у міру накопичення їх відсувають по ножу догори, звішуючи якщо потрібно. Після отримання стрічок потрібної довжини їх обережно знімають, користуючись препаровальной голкою, і пензликом і опускають у воду. Потім зрізи забирають і наклеюють на скла.
. Написи на предметних стеклах роблять ручкою з пером чорною тушшю.
Депарафінірованіе
Перед тим як приступити до фарбування зрізів, їх, як правило, піддають спеціальній попередній обробці. Парафінові зрізи вимагають найбільш складною підготовки. Так як парафін не володіє достатньою прозорістю і утрудняє процес фарбування (гістологічні барвники - це водні або спиртові розчини, погано проникають у парафіновані тканини), його необхідно видалити з зрізу. Для цього зріз піддають депарафінірованію - процес, зворотний тому, яки...
