ра.
Дослідження проводили в лабораторії кафедри біофізікі та біоінформатікі Львівського национального университета імені Івана Франка.
Перша група тварин служила контролем. Тваринам Другої та третьої груп на протязі 14-ти днів підшкірно вводили розчини гістаміну, концентрацією 1 та 8 мкг/кг відповідно (як вихідний розчин вікорістовувалі 0,01% гістаміну дігідрохлорід). На 1-шу, 7-му, 14-ту ту 21-шу (реабілітація) доби по п ять тварин з кожної групи декапітувалі під легким ефірнім наркозом (табл. 1). Швидко відбіралі праву нирку для проведення ДОСЛІДЖЕНЬ.
Таблиця 1. Схема досліду
відбір досліджуваніх зразківГрупі тварін1 доба7 доба14 доба21 добаІ (контроль) ---- ІІГістамін, 1 мкг/кгГістамін, 1 мкг/кгГістамін, 1 мкг/кг-ІІІГістамін, 8 мкг/кгГістамін, 8 мкг/ кгГістамін, 8 мкг/кг -
У відібраніх зразки визначавши стан системи антиоксидантного захисту за актівністю супероксиддисмутази (Костюк В.А., 1990). Кількість Білка у кожному зразки визначавши за методом Лоурі (Lowry OH, 1951).
Дані ДОСЛІДЖЕНЬ статистично обробляємих з віраховуванням Середніх Арифметичний величин (М), стандартної похібкі (m) i степінь вірогідності різниці (р), между Показники. Статистичності Обробка усіх даних результатів ДОСЛІДЖЕНЬ проводили з використанн програми «Excel - 97» для Windows.
2.2 Визначення актівності супероксиддисмутази
реактиви:
) ЄДТА 0,08 мМ;
мг - 10 мл Н 2 О;
мг - 50 мл Н 2 О;
) N, N, N, N - тетраметілетілендіамін;
) 0,1 М фосфатному буфері рН 7,8; ??
а) 0,2 М Na 2 PO 4;
б) 0,2 М NaН 2 PO 4;
) Кверцетин 1,4 мкМ на діметілсульфоксіді у розрахунку 45,4 мл кверцетину на 10 мл диметилсульфоксиду або діметілформаміду.
Визначення актівності СОД проводили у декілька етапів:
. Готувалі реактив С. Для цього змішувалі 100 мл ЄДТА та 100 мл фосфатного буферу рН 7,8, потім суміш доводили N, N, N, N - тетраметілетілендіаміном до рН? 10.
. Кверцетин переводили в рідкий стан, занурюючі у гарячу воду. Безпосередно перед визначенням кверцетин Розвода у розрахунку: 0,2 мл кверцетину доводили дістільованою водою до 2 мл.
У пробірку для контролю додавали 1 мл реактиву С, 2,4 мл Н 2 О, 0,1 мл кверцетину.
У дослідну пробірку додавали 1 мл реактиву С, 2,3 мл Н 2 О, 0,1 мл гомогенату, 0,1 мл кверцетину.
. Суміші в обох пробірках перемішувалі І ШВИДКО вімірювалі. Вимірювання проводили на спектрофотометрі СФ - 26 при довжіні Хвилі? =406 нм проти контрольної проби Кверцитин в нульовий момент (Одразу после Додавання кверцетину) та через 20 хв.
Активність СОД віраховувалі за формулою:
А (акт СОД)=[(D - D/D) · 100] · 29,49=од. акт/хв мг Білка,
=E до вих.- Е дослід 20 хв,=Е досл вих.- Е досл 20 хв,
де А (актСОД) - Активність супероксиддисмутази; - значення оптічної Густин;
Е - екстінкція.
2.3 Визначення актівності каталази
Принцип методу базується на здатності Н 2 О 2 утворюваті з солями молібдену Стійкий забарвленій комплекс. Інтенсівність забарвлення перекисних Сполука молібдену покладів від кількості Н 2 О 2 в розчіні (Королюк М.А., 1988). Каталаза, розкладаючі пероксид водні, зменшує інтенсівність забарвлення в пробі.
реактиви:
1) 0,03% розчин Н 2 О 2;
2) 4% розчин молібдату амонію;
) 0,5 н Н 2 SO 4 та 0,25 н Н 2 SO 4
каталазного реакцiю запускали Додавання 0,1 мл гомогенату до 2 мл Н 2 О 2. У неодружених пробу вместо гомогенату вносили 1 мл молібдату амонію. Реакцію у дослідних пробірках зупінялі через 10 хвилин Додавання 1 мл Розчин молібдату амонію. У контрольні проби додавали 0,1 мл гомогенату. После ретельного перемішування до дослідних пробірок вносили по 1 мл 0,25 н Н 2 SO 4, а до контрольних - по 1 мл 0,5 н Н 2 SO 4.
Інтенсівність забарвлення контрольної та дослідної проб визначавши спектрофотометричного при довжіні Хвилі 410 нм проти води.
Активність каталази визначавши за фомулу:
А кат =? Е · 0,18/С
де D Е - Різниця екстінкції пустої та дослідної проб;
, 18 - молярна коефіцієнт екстінкції комплексу Н 2 О 2 з молібдатом амонію Рівний 22...
