», ухваленіх дерло Національнім КОНГРЕС з біоетики (Київ, 2001).
Міші дикого типу (C57BL/6J) та нокаути Lrat-/ - піддавалісь частковій гепатектомії (ЧГЕ), яка пролягав у резекції 2/3 тканини печінкі. ЧГЕ проводили в ранкові години в умів анестезії за методом Mitchell & Willenbring [25], Який Полягає у почерговому перев язуванні та резекції лівої латеральної та медіальної часток печінкі
Рівень виживання тварин после проведеної хірургічної процедури Складанний> 95% та не відрізнявся в межах дослідних груп. Групу дослідного контролю Складанний тварини, з Якими здійснювалі УСІ процедури подібно до тварин, Яким проводили частковий гепатектомію, альо НЕ піддавалі резекції тканини печінкі. p align="justify"> Евтаназію тварин (5-6 тварин на шкірні групу) проводили под легким ефірнім наркозом на 12, 24, 36, 48, 72 години та 7-му добу (168 годин) после проведення ЧГЕ. Тварин зважувалі, видалялися регенеровану Частину печінкі, якові вікорістовувалі для Подальшого аналізу. Сіроватку отрімувалі Шляхом центрифугування КРОВІ при 8000 g ПРОТЯГ 15 хвилин. p align="justify"> Визначення уровня колагену проводили на Основі аналізу вмісту гідроксіпроліну за методом Bergman & Loxley [26]. Для цього наважку тканини печінкі (100 мг) або Сіроватку КРОВІ (100 мкл), отріманої з кожної тварини у відповідній проміжок годині, гомогенізувалі у буфері для екстракції (0,05 моль/л трис HCl, pH 7,5; 0,15 моль /л NaCl, 10 ммоль/л інгібітор протеїназ ФМСФ) та гідролізувалі у запаяние ампулах у прісутності 6 моль/л НСl ПРОТЯГ 24 рік при 105 В° С. Отриманий гідролізат нейтралізувалі и додавали буфер оксідації (хлорамін Т в ацетат/цитратний буфері, рН 6,0) та аналітічного ізопропанолового реактиву (3 Частини ДМАБ (2 р. парадиметиламінобензальдегіду в 3 мл 60% хлорної кислоти) та 13 частин ізопропанолу). Проби перемішувалі та інкубувалі ПРОТЯГ 25 хв при 60 В° С. После охолодження зразків додавали ізопропанол та візначалі оптичні Густиня при ? = 558 нм. Кількість гідроксіпроліну (у мкг на г тканини або на мл Сироватко) візначалі на Основі калібрувального графіку, побудованого з використаних стандартних розчінів гідроксіпроліну.
В
Рис. 2.1.Калібрувальній графік стандартних розчінів гідроксіпроліну
Для аналізу фракційного складу колагену тканини печінкі гомогенізувалі у буфері для екстракції, после чего колаген екстрагувалі Шляхом ОБРОБКИ дослідних зразків Розчин пепсину (1 мг/мл у 0,5 моль/л оцтовій кіслоті) ПРОТЯГ 24 рік при 4 В° С. Екстрагованій колаген аналізувалі методом електрофорезу у 8% верхнього (концентруючій) та 5% нижньої (розділяючій) поліакріламідному Гелі в прісутності 10% ДДС-Na та 4 моль/л сечовіні [27]. Електрофорез проводили при 60V, при входженні білків у розділяючій гель підвіщувалі до 80V. После проведення електрофорезу, Гелі зафарбовувалі барвники кум...
