екомбінантними ДНК1976Разработани методи визначення нуклеотидної послідовності ДНК1978Фірма Genetech випустила людський інсулін, отриманий за допомогою Е.coli1980Верховний суд США, слухаючи справу Даймонд проти Чакрабарті, виніс вердикт, що мікроорганізми, отримані генно-інженерними методами, можуть бути запатентовани1981Поступілі в продаж перші автоматичні синтезатори ДНК1981Разрешен до застосування в США перший діагностичний набір моноклональних антітел1982Разрешена до застосування в Європі першу вакцину для тварин, отримана за технологією рекомбінантних ДНК1983Для трансформації рослин застосовані гібридні Ti -плазміди1988Видан патент США на лінію мишей з підвищеною частотою виникнення пухлин, отриману генно - інженерними методамі1988Создан метод полімеразної ланцюгової реакції (ПЛР) 1990В США затверджено план випробувань генної терапії з використанням соматичних клітин людини 1990Офіціально розпочато роботи над проектом Геном людини 1994-1995Опубліковани докладні генетичні та фізичні карти хромосом человека1996Ежегодний обсяг продажів першого рекомбінантного білка (еритропоетину) перевищив 1 млрд. долларов1996Определена нуклеотидная послідовність всіх хромосом еукаріотичного мікроорганізма1997Клоніровано ссавець з диференційованої соматичної клітини
2. Генна інженерія
Важливою складовою частиною біотехнології є генетична інженерія. Народившись на початку 70-х років, вона домоглася сьогодні великих успіхів. Методи генної інженерії перетворять клітини бактерій, дріжджів і ссавців в фабрики для масштабного виробництва будь-якого білка. Це дає можливість детально аналізувати структуру та функції білків і використовувати їх в якості лікарських засобів. В даний час кишкова паличка (E. coli) стала постачальником таких важливих гормонів як інсулін і соматотропін. Раніше інсулін отримували з клітин підшлункової залози тварин, тому вартість його була дуже висока.
Генна інженерія - розділ молекулярної біотехнології, пов'язаний із здійсненням переносу генетичного матеріалу (ДНК) з одного організму в інший.
Термін генетична інженерія з'явився в науковій літературі в 1970 р, а генетична інженерія як самостійна дисципліна - у грудні 1972 р, коли П. Берг і співробітники Стенфордського університету (США) отримали перші рекомбинантную ДНК, що складається з ДНК вірусу SV40 і бактеріофага? dvgal. У нашій країні завдяки розвитку молекулярної генетики та молекулярної біології, а також правильній оцінці тенденцій розвитку сучасної біології 4 травня 1972 в Науковому центрі біологічних досліджень Академії наук СРСР у м Пущино (під Москвою) відбулося перше робочу нараду з генетичної інженерії. З цієї наради і ведеться відлік усіх етапів розвитку генетичної інженерії в Росії.
Бурхливий розвиток генетичної інженерії пов'язано з розробкою новітніх методів досліджень, серед яких необхідно виділити основні:
Розщеплення ДНК (рестрикція) необхідно для виділення генів і маніпуляцій з ними;
гібридизація нуклеїнових кислот, при якій, завдяки їх здатності зв'язуватися один з одним за принципом комплементарності, можна виявляти специфічні послідовності ДНК і РНК, а також поєднувати різні генетичні елементи. Використовується в полімеразної ланцюгової реакції для ампліфікації ДНК in vitro;
клонування ДНК - здійснюється шляхом введення фрагментів ДНК або їх груп в бистрорепліцірующіеся генетичні елементи (плазміди або віруси), що дає можливість розмножувати гени в клітинах бактерій, дріжджів або еукаріот;
визначення нуклеотидних послідовностей (секвенування) в клонируемого фрагменті ДНК. Дозволяє визначити структуру генів і амінокислотну послідовність кодованих ними білків;
хіміко-ферментативний синтез полінуклеотидів - часто необхідний для цілеспрямованої модифікації генів і полегшення маніпуляцій з ними.
Б. Глік і Дж. Пастернак (2002) описали наступні 4 етапи експериментів з рекомбінантної ДНК:
. З організму-донора екстрагують нативну ДНК (клонируемого ДНК, що вбудовується ДНК, ДНК-мішень, чужорідна ДНК), піддають її ферментативному гідролізу (розщеплюють, розрізають) і з'єднують (лигируют, зшивають) з іншого ДНК (вектор для клонування, клонуючий вектор) з утворенням нової рекомбінантної молекули (конструкція клонуючий вектор - вбудована ДНК ).
. Цю конструкцію вводять в клітину-господаря (реципієнта), де вона реплікується і передається нащадкам. Цей процес називається трансформацією.
. Ідентифікують і відбирають клітини, що несуть рекомбинантную ДНК (трансформовані клітини).
. Отримують специфічний білковий продукт, синтезований клітинами, що є підтвердженням клонування шуканого гена.
3. Клонуванн...
