боксильная група. Водорозчинні іонні або іонізіруемие з'єднання притягуються смолами, а різниця в спорідненості обумовлює хроматографічне розділення. Значення рH рухомої фази, температура, тип іона, іонна концентрація і органічні модифікатори впливають на рівновагу. Для отримання бажаного ступеня поділу дані параметри можна коригувати.
В есклюзіонной хроматографії колонки набиваються пористої нерухомою фазою. Молекули хроматографіруемого з'єднань фільтруються відповідно до розміру. Молекули, які занадто великі для проникнення в пори, проходять через колонку без затримки. Менші молекули потрапляють в пори і утримуються тим довше, чим менше розмір молекул. Ці колонки зазвичай використовують для вимірювання агрегації і розкладання великих молекул.
.5 Детектори і пристрої для збору даних
Багато фармакопейні методики високоефективної рідинної хроматографії вимагають використання спектрофотометричних детекторів. Такий детектор складається з проточною кювети, закріпленої на кінці колонки. Пучок ультрафіолетового світла проходить через кювету і потрапляє на детектор. У міру елюювання сполук з колонки вони проходять через кювету і поглинають випромінювання, приводячи до вимірюваного зміни рівню енергії.
Широко доступні детектори з фіксованою, змінною і множинної довжиною хвилі. Детектори з фіксованою довжиною хвилі працюють при одиночній довжині хвилі, зазвичай 254 нм, испускаемой ртутної лампою низького тиску. Детектори із змінною довжиною хвилі містять безперервне джерело, такий як дейтерієва або ксенонова лампа високого тиску, і монохроматор або інтерференційний фільтр для отримання монохроматичного випромінювання з довжиною хвилі, обраної оператором. Точність довжини хвилі детектора із змінною довжиною хвилі, оснащеного монохроматором, необхідно перевіряти за рекомендованою виробником методикою. Якщо спостережувані довжини хвиль відрізняються більш ніж на 3 нм від істинних значень, необхідна перекалібровка приладу. Сучасні детектори з змінною довжиною хвилі можуть програмуватися на зміну довжини хвилі по ходу аналізу. Детектори з множинними довжинами хвиль вимірюють поглинання при двох або більше довжинах хвиль одночасно. У детекторах на диодной матриці безперервне випромінювання пропускається через кювету із зразком, потім дозволяється на складові довжини хвиль, які індивідуально детектируются фотодіодною матрицею. Ці детектори отримують дані на всьому інтервалі УФ і видимого світла, забезпечуючи, таким чином, аналітика хроматограму при множинних обираних довжинах хвиль і спектрами елюіруемих піків. Детектори на диодной матриці зазвичай мають менший стосунок сигнал / шум, ніж детектори з фіксованою або змінною довжиною хвилі, а отже, менш придатні для аналізу сполук, присутніх в низьких концентраціях.
Диференціальні Рефрактометричні детектори вимірюють різницю між показником заломлення чистої рухомої фази і показником заломлення рухомої фази, що містить хроматографіруемого з'єднання, в міру її виходу з колонки. Рефрактометричні детектори використовують для детекції сполук, що не поглинаючих в УФ - області, але вони мене чутливі, ніж УФ - детектори. Вони чутливі до малих змін у складі розчинника, швидкості потоку і температурі, тому для отримання задовільною базової лінії може знадобитися колонка порівняння.
флуоріметріческой детектори чутливі до з'єд...
