лаків (рис, кукурудза, пшениця, сорго), що постачає їх вуглеводами. Найбільш широко роботи ведуться з бактеріями Azospirillum (Postgate, 1989). У серії дослідів, проведених у різних штатах Індії, інокуляція насіння пшениці, рису, сорго, проса ри-зосфернимі азотфиксаторами забезпечувала прибавки урожаю зерна до 30% (Subba Rao, 1982).
3.3 Методи генної інженерії
До методів прямого перенесення чужорідної ДНК в протопласти рослин і тварин відноситься електропарація: короткочасні електричні розряди (1-100 мкс при напруженості поля 1000-10000 В/см2) збільшують проникність мембран протопластів, куди і проникає знаходиться в розчині ДНК. Так були отримані трансформанти кукурудзи, рису і цукрового тростини. У MCXA розробляється метод запровадження чужорідної ДНК з використанням електрофорезу в агарових гелі. Показано можливість застосування даного методу для трансформації каллусов пшениці з подальшою регенерацією з них трансгенних рослин.
Оригінальний спосіб введення чужорідної ДНК в злаки розроблений в Корнельському університеті США. За допомогою генетичного пістолета в клітини рослин вистрілюють крихітні вольфрамові кульки, вкриті генетичним матеріалом. Наприклад, спосіб балістичної трансформації застосували для введення гена вірусу тютюнової мозаїки в клітини цибулі. Була встановлена ​​експресія гена в клітинах (Уайк, 1988). Метод високошвидкісної балістичної трансформації в даний час широко використовується в Центрі "Біоінженерія", ІМГ, ІФР. ВНІІСБ при створенні трансгенних рослин пшениці, кукурудзи, соняшнику, плодових.
В
3.4 Невирішені проблеми генної інженерії.
Однією з найзначніших труднощів генної інженерії є введення в геном великих генів або декількох функціональних генів. Це пов'язано з ємністю векторів для трансформації. Гени, особливо еукаріотичні значні за розміром (5-15 т.н.п.), але вони все частіше використовуються для трансформації рослин. Але крім обраного гена векторні конструкції повинні містити в собі селективні гени. У деяких випадках для укорочення конструкції використовують кДНК послідовності. Однак кДНК комплекси не завжди прийнятні з-за специфіки сплайсингу in vivo.
Лімітуючим фактором для трансформації рослин може бути й те, що необхідний ознака кодується кількома генами, і отримання трансгенних рослин володіють такими ознаками поки технічно не здійснимо. p> Окремо стоїть проблема, що виникає при експресії чужорідного гена. Часто після двох - п'яти поколінь активно транскрибується ген, перестає експресуватися. Найчастіше інактивація трансгени відбувається через метилування регуляторних послідовностей, або можлива репресія в результаті взаємодії з промотором якихось білків. Активувати такий вимкнений трансген не представляється можливим. Спрогнозувати дану ситуацію таки важко, оскільки вона залежить від ряду факторів, у тому числі і від послідовності самого білка і конкретному місці інтеграції його в геном рослини. Подолати це ймо...
