pH? 4,5 (ацетат. Буфер) додавали сульфіт, у вигляді Na 2 SO 3, і нагрівали при температурі 40 0 ??C протягом 2-3 ч. Утворений в розчині бісульфіт-іон витісняв ціанід з утворенням сульфітокобаламіна (червоний розчин набував блідо-червоний відтінок), а отримана синильна кислота, яка будучи легколетучую рідиною, віддалялася за рахунок випаровування (Т кип.=26 - 30 0 C).
2. До звільненого від HCN розчину сульфітокобаламіна додавали розчин HCl до pH? 1, для переходу вільного бісульфіт-іона в SO 2 (див. Ур-ие 1.8). Колір розчину при цьому змінювався з червоного на жовтий. Вільний SO 2 віддалявся з розчину за рахунок нагрівання реакційної суміші до температури 40 0 ??C.
. Видалення SO 3 2- з сульфітакобаламіна проводили опроміненням розчину світлом протягом 4-5 год (колір розчину набуває яскраво червоний колір). По закінченні процесу опромінення був знятий спектр отриманого продукту, який був ідентичний спектру H 2 OCbl.
Схема вище викладеного синтезу представлена ??на рис. 3.3.1.
Рис. 3.3.1. Механізм синтезу аквакобаламіна.
Висновки
1.Проведени дослідження кислотно-основних властивостей цианокобаламина, в ході яких були визначені константи його Протолітична рівноваги: ??pKa1=- 1,61 ± 0,9 і pKa2=0,082 ± 0,47.
.Показано, що взаємодія цианокобаламина з сульфитом протікає по внутрісферному механізму, в ході якого сульфіт/бісульфіт-іон заміщає ціанід і утворює сульфітокобаламін.
.Показано, що залежно від pH розчину, сульфітокобаламін існує у двох формах base-on/off - червоною/жовтою. Визначено pKa даного процесу: 2,02 ± 0,03.
.Ізучена кінетика процесу взаємодії цианокобаламина з сульфитом в розчинах. Визначено кінетичні та активаційні параметри процесу. Показано, що швидкість реакції складним чином залежить від концентрації H +, а швидкість лімітуючим етапом є приєднання протона, що вказує на загальний кислотний каталіз процесу.
.Показано, що активною формою кобаламина є депротонованої ціанокобаламін, причому протонирование ДМБІ і коррінового кільця кобаламина призводить до інгібування реакції. Активними частинками також є SO2 і HSO3-.
.Предложен новий метод отримання аквакобаламіна.
Список використаної літератури
1.Brown K. Chemistry and Enzymology of Vitamin B12/K. Brown//Chem. Rev.- 2005. - V. 105. - P. 2075-2149.
.Pezacka E. Glutathionycobalomin as an intermediate in the formation of cobalamin coenzymes/E. Pezacka, RG Green, D.W. Jacobsen//Biochem. Biophys. Res. Commun.- 1990 - Vol. 169. - P. 443-450.
.Kim J. Decyanation of vitamin B12 by a trafficking chaperone/J. Kim, C. Gherasim, R. Banerjee//PNAS.- 2008. - Vol. 105. - P. 14551-14554.
.Ahmad I. Photolysis of cyanocobalamin in aqueous solution/I. Ahmad, W. Hunssain, A. Ali Fareedi//Journal of Pharmaceutical amp; Biomedical Analysis.- 1992. - Vol. 10 - № 1 - P. 9-15.
5.Jensen M.P. Halpern, J.J. Dealkylation of Coenzyme B12and Related Organocobalamins: Ligand Structural Effects on Rates and Mechanisms of Hydrolysis lt;http://pubs.acs/doi/abs/10.1021/ja982340e?prevSearch=Jensen%2BM.%2BP.%252C%2BHalpernamp;searchHistoryKey=gt;/M. P. Jensenm, J. J. Halpern//Am. Chem. Soc.- 1999. - Vol. 121 - P. 2181-2192 - Supporting Info. P. 41-47.
6.Березовскій В.М. Хімія вітамінів/Березовський, В.М; під заг. ред. Калменса Р.І., Бєлікової Л.С.- 2-е вид.- М .: Харчова промисловість 1973. - 634 с.
.Юркевіч А.М. Біоорганічна хімія. У 14 кн. Кн. 5. Структура, властивості та механізм дії кобаламіновие коферментів /А.М. Юркевич, І.А. Ваніна, В. М. Козлов.- М .: Наука, 1984. - 310 с.
8.Randaccio L. Vitamin B12: Unique Metalorganic Compounds and the Most Complex Vitamins/L. Randaccio, S. Geremia, N. Demitri, J. Wuerges//Molecules.- 2010. - V.15 - P. 3228-3259.
.Johnson A. Measurement of Disproportionation Rates at the Dropping Mercury Electrode/A. Johnson, G. Miller, J. Mills, A. Todd//J. Chem. Soc.- 1953. - Vol. 75 - P. +3061.
.Hodgkin, D. Structure of Vitamin B12/D. Hodgkin, J. Kamper, M. Mackey, J. Pickworth, K. Trueblood, J. White//Nature, - 1956. - Vol. 178 - P. 64-66.
.Rickes E. Vitamin B12, A Cobalt Complex/E. Rickes, N. Brink, F. Keniuszy, T. Wood, K. Folkers//Science, - 1948. - Vol. 108 - P. 134.
12.Смірнов М.І. Вітаміни М.І.. Смирнов, М.: Медицина, 1974.- 450 с.
13.Jensen B.O. A polarographic method for measuring dissolved nitric oxide/BO Jensen, J. Skeidsvoll, H. Holmsen//J. Biochem. Biophys. Methods.- 1997. - Vol. 35. - P. 185-195.
.Bernhauer K. New Chemical and Biochemical Developments in the Vitamin B12 Field/K. Bernhauer, O. M? ller, F. Wagner//Angew. Chem.- 1964. - Vol. 3. - P. 200.
15.Мосін О.В. Мікробіологічни...
