ГБОУ ВПО НіжГМА Росздрава
Кафедра патологічної фізіології
РЕФЕРАТ
Проточна цітофлоуметрія як метод імунології
Виконала: студентка 4 курсу
лікувального факультету
Колесніков Р.П.
Перевірила: професор кафедри
Шевченко Е.А.
Н. Новгород 2014
Зміст
Введення
Принципова схема пристрою
Принцип роботи проточного цитофлуориметр
Порівняльна характеристика приладів для проточної цитометрії
Діагностичні набори для проточної цитометрії
Література
Введення
Перший патент на пристрій, що лягло в основу проточної цитометрії, що використовує принцип опору Култера було зареєстровано в США в 1953 році, його автор Wallace H. Coulter. Адсорбційні методи на той момент були поширені набагато ширше флуоресцентних. Перший прилад, що використовує флуоресценцію, був створений в 1968 році Wolfgang G? Hde з University of M? Nster і майже відразу отримав комерційного використання німецьким розробником і виробником Партек (Partec) в Геттінгені. Новий метод швидко отримав своє визнання і розвиток, і в період 70 х років з'явилося кілька інструментів для проточної цитометрії включаючи Cytofluorograph (1971) від Bio/Physics Systems Inc., PAS 8000 (1973) від Partec, перші FACS оснащують датчиками від Becton Dickinson ( 1974), ICP 22 (1975) від Partec/Phywe і Epics від Коултера (1977/78). Спочатку методику називали пульсової цітофлоуметріей. Тільки 20 років потому в 1988, на Конференції американського Технічного Фонду в Пенсаколі, штат Флорида, назва була змінена на проточну цитометрию raquo ;.
проточна цітофлоуметрія імунологія діагностичний
Принципова схема пристрою
Проточний цитометр включає три основні блоки:
) Оптичний, де проводиться вимірювання
2) Блок обробки сигналів, де сигнали посилюються і перетворюються в електричні.
) Блок збору і обробки даних.
Оптичні системи
Джерелом світла зазвичай служить лазер. Він здатний направити на клітину інтенсивний світловий сигнал і створити чутливу систему виявлення.
Світовий сигнал проходить через відповідні лінзи і дзеркала і потрапляє на ФЕП. На цій стадії передачі сигналу використовуються оптичні фільтри для виділення світла з певною довжиною хвилі, завдяки чому на кожен детектор потрапляє тільки обраний тип світлового сигналу, наприклад зелене або червоне випромінювання клітин при флуоресценції або розсіяне світло. Оптичний блок призначений для вимірювання розсіювання світла і флуоресценції. Сучасні цитометрию обладнані декількома фотоелектронними помножувачами, що дозволяє одночасно реєструвати декілька типів флуоресценції.
Система збору та обробки даних
Сигнали, що надходять від детекторів, посилюються, їх амплітуди вимірюються й аналізуються в цифровій формі для кожної клітини окремо. Результати аналізу використовуються для побудови розподілів (гістограм) досліджених клітин за їх характеристиками.
Принцип роботи проточного цитофлуориметр
Проточна цитометрия - метод дослідження дисперсних середовищ в режимі поштучного аналізу елементів дисперсної фази за сигналами світлорозсіювання та флуоресценції. Назва методу пов'язано з основним додатком, а саме, з дослідженням одиночних біологічних клітин в потоці.
Метод проточної цитофлуориметрії широко використовується в медико-біологічних дослідженнях. Затребуваність цитометрії пояснюється швидкістю, точністю і надійністю методу. Визначення фенотипу кожної клітини в поєднанні з аналізом великої кількості подій дає максимально повну інформацію в найкоротші терміни.
При проведенні дослідження клітини, пофарбовані тим чи іншим флуоресцентним барвником, вводять з потоком буферного розчину в вібруючу камеру з форсункою. У кожній краплі рідини, що виходить з форсунки, міститься одна клітина. Джерело світла (найчастіше лазер) висвітлює окремі клітини в проходить через світловий пучок тонкої струмені рідини. Вихідний світловий промінь розсіюється кліткою. Це розсіювання вимірюється за допомогою фотоелектронного помножувача (ФЕУ). Розсіювання світла під малими кутами може бути в...
