Методи світлової та електронної мікроскопії
1. Світлова мікроскопія
світловий електронний мікроскоп інтерференція
Принцип робота світлового мікроскопа полягає в тому, що пучок світла від джерела освітлення збирається в конденсаторі і спрямовується на об'єкт. Пройшовши через нього, промені світла потрапляють в систему лінз об'єктива. Вони вибудовують первинне зображення, яке збільшується за допомогою лінз окуляра. В цілому об'єктив і окуляр дають зворотне уявне і збільшене зображення об'єкта.
Світовий мікроскоп може підвищити роздільну здатність людського ока приблизно в 1000 разів. Це є корисним збільшенням мікроскопа. При використанні видимій частині спектру світла кінчений межа дозволу світлового мікроскопа становить 0,2-0,3 мкм. Далі будуть розглянуті методи світлової мікроскопії.
. 1 Метод темного поля (ультрамікроскопії)
Метод темного поля в прохідному світлі заснований на ефекті Тиндаля, оскільки подібна частинкам пилу з промені світла, при бічному освітлення Світло найдрібніші частинки, відбите світло від яких потрапляє в об'єктив мікроскопа. Світло від освітлювача і дзеркала направляється на препарат конденсором темного поля. По виході з конденсора основна частина променів світла, що не змінила свого напрямку при проходженні через прозорий препарат не потрапляє в об'єктив. Зображення в мікроскопі формується за допомогою лише невеликої частини променів, розсіяних мікрочастинками знаходиться на предметному склі препарату. У полі зору на темному тлі видно світлі зображення елементів структури препарату, що відрізняються від навколишнього середовища показником заломлення. У великих часток видно лише світлі краю, що розсіюють промені світла.
В основі методу ультрамікроскопії лежить той же принцип - препарати в ультрамікроскопів висвітлюються перпендикулярно напрямку спостереження. При цьому методі можна виявити надзвичайно дрібні частинки, розміри яких лежать далеко за межами роздільної здатності найбільш сильних мікроскопів. За допомогою іммерсійних ультрамікроскопів вдається зареєструвати присутність в препараті часток розміром до 2 10 - 9 м. Але форму і точні розміри цих часток за допомогою цього методу визначити неможливо. Ультрамікроскопів застосовуються в основному в колоїдної хімії.
. 2 Метод світлого поля і його різновиди
Метод світлого поля в прохідному світлі застосовується при вивченні прозорих препаратів з включеними в них поглинаючими світло частинками і деталями. У відсутність препарату пучок світла з конденсора, проходячи через об'єктив, дає поблизу фокальної площини окуляра рівномірно освітлене поле. При наявності в препараті абсорбуючого елемента відбувається часткове поглинання і часткове розсіювання падаючого на нього світла, що і обумовлює появу зображення.
Метод косого освітлення - різновид попереднього методу. Відмінність між ними полягає в тому, що світло на об'єкт направляють під великим кутом до напрямку спостереження, це допомагає виявити рельєфність об'єкта за рахунок утворення тіней.
Метод світлого поля у відбитому світлі застосовується при дослідженні непрозорих відбивають світло об'єктів. Освітлення проводиться зверху, через об'єктив, який одночасно грає і роль конденсора. У зображенні, створюваному в площині об'єктивом спільно з тубусной лінзою, структура препарату видна через відмінності в відбиває здатності її елементів; на світлому полі виділяються також неоднорідності, що розсіюють падаюче на них світло.
1.3 Метод фазово-контрастної мікроскопії
Велика частина клітинних структур мало відрізняється коефіцієнтом заломлення світла, поглинання променів один від одного і середовища. Для того, щоб вивчити такі компоненти доводиться змінювати освітленість (з втратою чіткості зображення) або застосовувати особливі методи і прилади. Метод фазово-контрастної мікроскопії є одним з таких. Його широко застосовують при вітальному вивченні клітин. Суть методу в тому, що навіть при дуже малих відмінностях в показниках заломлення різних елементів препарату світлова хвиля, що проходить через них, зазнає різні зміни по фазі. Невидимі безпосередньо ні оком, ні фотопластиною, ці фазові зміни за допомогою спеціального оптичного пристрою перетворяться в зміни амплітуди світлової хвилі, т. Е. В зміни яскравості, які вже помітні оком або фіксуються на фоточутливому шарі. У вихідному видимому зображенні розподіл яркостей (амплітуд) відтворює фазовий рельєф. Одержуване таким чином зображення називається фазово-контрастним. Об'єкти мо...
