Введення
Для багатьох досліджень, пов'язаних з вивченням біологічних структур велику цінність представляють реагенти, здатні специфічно взаємодіяти з даною структурою. Універсальним реагентів, що володіє вказаними властивостями є молекула імуноглобуліну. Імунна система виробляє специфічні антитіла на величезну безліч антигенів. В основі такої здатності лежить наявність великої різноманітності клонів лімфоцитів, кожен з яких виробляє антитіла одного типу з вузькою специфічністю. [1]
Перед дослідниками спочатку стояла проблема отримання антитіл з вузькою специфічністю. Відкриття в 1975 році Д. Келером і С. Мільштейном способу отримання моноклональних антитіл вирішило цю задачу.
Моноклональні антитіла неймовірно швидко увійшли в клінічну практику. Найбільш широко вони використовуються в медичній діагностиці. Моноклональні антитіла, введені в живий організм, приєднуються до уражених хворобою клітинам, а відповідні індикаторні матеріали дозволяють з'ясувати їх місцезнаходження. Останнім часом активно розробляються методи лікування ракових пухлин за допомогою моноклональних антитіл. [2]
Метою даної роботи було вивчення методу отримання моноклональних антитіл шляхом злиття клітин мишачої мієломи з В-лімфоцитами, що виробляються клітинами селезінки імунізованих миші.
1. Моноклональні антитіла. Історія відкриття
Імунна система організму захищає його від живих тіл і речовин, що несуть в собі ознаки чужорідної генетичної інформації, тобто антигенів. Антигенами можуть бути будь-які мікроорганізми - бактерії, гриби, віруси; клітини іншого організму - клітини трансплантата, крові. Антигенами є також отрути, токсини, ферменти, гормони, макромолекули - білки, полісахариди, ліпіди з чужорідної генетичної матрицею. Антигенами можуть стати і клітини власного організму, які зазнали генетичних змін. [2]
Імунна система розпізнає чужорідні субстанції і включає відповідні механізми для інактивації антигенів. Основу імунологічної реактивності організму становить складний комплекс імунологічних реакцій, що здійснює розвиток клітинного та гуморального імунітету. Останній обумовлений продукцією антитіл, циркулюючих в рідких середовищах організму.
Антитіла володіють унікальною властивістю - абсолютною специфічністю, тобто здатністю реагувати лише з тим антигеном, проникнення якого в організм викликало їх появу. Після появи в організмі антигену, з В-лімфоцитів, що знаходяться в крові, селезінці, лімфовузлах, диференціюються плазматичні клітини. Кожен з В-лімфоцитів здатний синтезувати антитіла лише однієї специфічності. Під впливом відповідного антигену відбувається стимуляція лімфоцита і виникнення клону, який синтезує певні антитіла. Різноманітність антитіл оцінюється цифрою 107, тобто існує стільки ж клонів антітелопродуцентов. В організмі одномоментно діє безліч клонів, тому сироватка є гетерогенною популяцією антитіл.
Справжній переворот в області імунології стався в 1970-х роках. Саме тоді була розроблена методика отримання моноклональних антитіл. Моноклональні антитіла - антитіла, що виробляються імунними клітинами, які належать одного клітинному клону, тобто відбулися з однієї плазматичної клітини-попередниці. Моноклональні антитіла можуть бути вироблені практично на будь-яку речовину (в основному білки і полісахариди), яке антитіло буде специфічно зв'язувати.
Клітини мієломи людини і мишей інтенсивно вивчалися вже з кінця 1960-х років, тому що представляли собою унікальну модель клону антителопродуцирующих клітин. У 1970 голу з'явилися перші повідомлення про отримання мишачих гібридом шляхом злиття мієломних клітин, що виробляють різні типи нормальних і варіантних молекул імуноглобулінів.
Процес отримання моноклональних антитіл був винайдений в 1975 році Жоржем Келером і Сезаром Мільштейном, за що в 1984 році вони отримали Нобелівську премію з фізіології. Ідея полягала в тому, щоб взяти лінію мієломних клітин, які втратили здатність синтезувати свої власні антитіла, і злити таку клітину з нормальним В-лімфоцитів, які синтезують антитіла, з тим, щоб після злиття відібрати освічені гібридні клітини, що синтезують потрібне антитіло.
Ця ідея була успішно реалізована і вже до початку 1980-х років почалося комерційне отримання різних гібридом і очистка антитіл проти заданих антигенів. [2]
2. Середовища для культивування
. 1 Опис основних середовищ для культивування
Основними середовищами, вживаними при отриманні гібридом, є середа RPMI 1640 і середу Голка в модифікації Дульбекко. Застосовуються й інші середовища, зокрема середу Дульбекко в модифік...
