covsky et. al., 1998]. Ген відноситься до групи високоефективних в багатьох країнах, у тому числі і Росії [Helguera et al., 2000; Zhemchuzhina, Kurkova, +2010; Shabnam et al., 2011]. Джерелом цього гена у м'якої пшениці є ярої сорт Pavon. Цей сорт широко використовується в MAS-селекції в Австралії та Франції [Gupta et al., 2011]. У лабораторії КНИИСХ джерелом цього гена є інтрогрессівние лінії, отримані за допомогою синтетичної геномної-заміщений форми Авродес. Ген Lr47 представляє потенціал для селекції в Росії.
ПЛР-маркер PS10 (праймери PS10R і PS10L) створений на основі RFLP-маркера Xabc465, локалізованого в 7S # 1 транслокації, переданої пшениці від T. speltoides. Специфічність ПЛР-маркера оцінювали з використанням 166 беккросная рослин пшениці, отриманих на основі п'яти зразків T. speltoides. Виявлено, що продукт амліфікаціі розміром 282 п.о. присутній тільки у зразків, що мають також фрагмент рестрикції після гібридизації з RFLP-маркером. Був зроблений висновок, що нуклеотидних послідовність маркера pS10 гомологична певної ділянки хромосоми 7S T. speltoides, що несе ген Lr47, і маркер PS10 може бути рекомендований для його ідентифікації [Helguera et al., 2000].
У ході ПЛР-аналізу, проведеного нами в лабораторії біотехнології КНИИСХ ні в одній з 22 ліній не було ідентифіковано маркера, зчепленого з геном Lr47.
Малюнок 7 - Продукти ампліфікації з використанням пари праймерів PS10R і PS10L до діагностичного маркеру, зчепленням з геном стійкості Lr47: 1 - маркер довжини; 2 - Аврора; 3 - зразок № 3 256; 4 - Авродес; 5-26 - лінії пшениці з генетичним матеріалом Ae. speltoides.
Ген Lr 21 переданий в м'яку пшеницю від Ae. Tauschii Coss. (= Ae. Squarrosa L., Triticum tauschii (Coss.) Schmal.) І локалізований в короткому плечі хромосоми 1D. L. Huang і B.S. Gill (2001) показали, що ген Lr40, раніше ідентифікований у лінії KS89WGRC07, ідентичний з Lr21. Ген Lr21 відноситься до групи високоефективних в США і Канаді [Kolmer et al., 2010]. У західній Європі ураженість лінії TcLr21 варіювала від 0 до 100% по роках і по країнах [Mesterhazy et al., 2000; Lind, Gultyaeva, 2007; Hanzalova et al., 2 008]. При багаторічному аналізі популяцій P. triticina з різних регіонів Росії ми щороку спостерігали високі значення частот вірулентності до гену Lr21 [Гультяева, Баранова, 2010]. Однак в польових умовах Північно-західного регіону інтенсивність ураження ліній TcLr21 і KS89WGRC07 в період 2002-2011 рр. не перевищувала 30%.
Ген Lr21 не знайшов застосування у світовій селекції незважаючи на те, що є одним з перших генів, інтродукованих в м'яку пшеницю від Ae. tauschii. Відомий тільки один сорт AC Cora, створений з його участю.
Незважаючи на обмеження у використанні цього гена в селекції він є одним з найбільш вивчених. Серед 67 відомих Lr-генів лише три (Lr1, Lr21, Lr34) клоновані і виявлено, що гени Lr1 і Lr21 ставляться до NBS-LRR-класу (гени стійкості, що кодують білки з сайтом зв'язування нуклеотидів і регіоном збагачених лейцин повторів) [Huang et al., 2003]. Це найбільш численна група клонованих до теперішнього часу генів стійкості рослин.
Для ідентифікації гена Lr21 запропоновано 2 ПЛР-маркера: D14 і Lr21F/R. Обидва цих маркера створені на основі ідентичного RFLP-маркера, конвертованого в CAPS і STS-маркери. Для їх ампліфікації використовують загальний прямий і різні зворотні праймери. Ефективність обох маркерів підтверджена при аналізі ліній, створених з використанням зразків Ae. tauschii різного географічного походження [Talbert et al., 1994; Huang, Gill, 2001].
У даній роботі був використаний маркер D14. Молекулярний вагу продукту ампліфікації у зразків з геном Lr21 при використання праймерів на маркер D14 становить 885 п.о. Однак для ідентифікації маркера гена Lr21 при використанні даного маркера перед постановкою електрофорезу потрібно гідроліз продукту ампліфікації ендонуклеазою рестрикції MSP I [Huang, Gill, 2001].
У ході ампліфікації і рестрикції, проведеної в лабораторії відділу біотехнології КНИИСХ в жодній з досліджуваних ліній не було знайдено маркера до гену Lr21.
Ген стійкості до листової іржі Lr51, раніше відомий як LrF7, був переданий в пшеницю від T. speltoides [Dvorak, 1977]. Lr51 локалізований на транслокації хромосоми 1B м'якої пшениці. У польових випробуваннях на стійкість до раси 5 P. triticina J. Dvorak показав, що рослини, гомозиготні по Lr51, є високоустойчіви, в той час як гетерозиготи показали досить низький рівень стійкості з невеликими пустулами, оточеними некрозами і хлороз [Dvorak, 1977].
Малюнок 8 - Продукти рестрикції з МSР1 ампліфікованих фрагментів, отриманих з використанням праймерів D14/L, D14/R до маркера зчепленням з геном сті...
