ДНК. Опинившись всередині клітини, чужорідна ДНК може локалізуватися не там, де це необхідно і, більше того, може опинитися в лізосомах, де буде зруйнована під дією нуклеаз. p align="justify"> Проникнення в клітку і внутрішньоклітинний транспорт ІПЕК відбувається, можливо, за рахунок освіти і послідовного руйнування ендосом. На кожному з етапів цього процесу істотна частина матеріалу втрачається. Убоге вивільнення векторів з ендосом в цитоплазму і неефективний перенесення їх в ядро ​​призводять до низької ефективності трансгенної експресії. br/>В
рестрикційний карта плазміди pBR 322:
цифрами вказана нумерація нуклеотидів;
тонкі рисочки - поодинокі сайти, впізнавані рестріктазами;
товсті сірі стрілки зверху - напрямок транскрипції; - промотор гена Ampr - стійкість до ампіциліну; промотор гена Tetr-стійкість до тетрацикліну; Т1 - Rho-незалежний термінатор транскрипції (положення 3140-3160); ТТ2 - положення 3080-3110; ROP - білок, що сприяє утворенню дуплексів між РНК 1 і РНК 2 (негативний регулятор копийности); РНК 1 - контрольна РНК (контролює копійность плазміди); РНК 2 - В«праймернойВ» РНК (служить запалом для реплікації); товсті чорні стрілки - напрям транскрипції РНК 1 і РНК 2
В
Вектори на основі фага М13
Можна виділити три шляхи підвищення ефективності переносу ДНК у еукаріотичні клітини за допомогою синтетичних полікатіон. По-перше, це підвищення специфічності трансфекції за рахунок лігандів, з'єднаних з молекулою полікатіона і забезпечують виборче взаємодія комплексів з клітинами певного фенотипу. По-друге - підвищення ефективності трансформації за рахунок підбору генів або олігонуклеотидів, впроваджуваних в клітку. По-третє - підвищення частоти трансфекції, яке досягається за рахунок застосування лігандів, більш ефективно взаємодіють з клітинної мембраною, і речовин, дестабілізуючих мембрану. Крім того, можливий синтез нових полікатіон. p align="justify"> У лабораторії молекулярної вірусології та генної інженерії НДІ грипу РАМН в Санкт-Петербурзі проводиться вивчення засобів доставки ДНК і вірусних частинок в клітини. У цій роботі використовується набір полімерних носіїв, синтезований співробітниками Інституту високомолекулярних сполук РАН. В якості експресійних векторів використовувалися плазміди: pUC 18, що містить цитомегаловірусний промотор і ген b-галактозидази, і pBR 322, що містить цитомегаловірусний промотор і ген зеленого флуоресцентного білка водоростей. p align="justify"> В результаті проведених досліджень було з'ясовано, що найбільшу трансфекціонную активність мають ІПЕК полі-(2 - (диметиламіно) етил) метакрилату (PDMAEMA) з низькими молекулярними масами. Подальші дослідження дозволять розробити нові підходи до вирішення актуальних проблем у вірусології, молекулярної і клітинної біології, генної інженерії, генної терапії. p align="justify"> Трансдук...
