аркують, вказуючі его Готовність до роботи. Зберігаті обладнання та патенти в чистому и сухому стані.
Вирощування біомасі штам-продуцента R1
Проростки насіння женьшеню справжнього Panax ginseng CA Mеy трімісячного віку, інокулював агробактерій Agrobacterium rhizogenes A4. Пухлини, отрімані на стеблах проростків в місцях інокуляції бактерій, переведені в стерильну культуру и є віхіднім матеріалом для Отримання калуса штам R1. Насіння женьшеню справжнього Пріморської популяції отрімані з Зональної дослідної станції Всесоюзного інституту лікарськіх рослин (сіл. Стара Варварівка Приморського краю).
Культуральні Властивості. ЗРОСТАЮЧИЙ калусна культура представляет собою тканинний пухкої консістенції світло-зеленого кольору, рідше жовто-зеленого кольору без запаху. Ростової індекс культури 14 ± 2 по сірому вагою для калусів початково масою 80 мг, вміст сухої Речовини 5,3 ± 1,3% живих клітін в середіні експоненційної фази росту 90-94%
способ культівування вирощування в Накопичувальний режімі на агарізованому жівільному середовіщі за відсутності освітлення при температурі 25 ± 1оС, відносної вологості Повітря 70 ± 10% на жівільному середовіщі следующего складу, мг/л води: NH4NO3350-450, KNO3 1500-2300, CaCl2,2H2O 400-480, MgSO4, 7H2O 350-400, KH2PO 150-190, H3BO3 4,2-8,0, MnSO4.4, H2O 15,6-26,7, CoCl2, 2H2O 0, 02-0,03, CuSO4? , 5H2O 0,02-0,03, ZnSO4,7H2O 6,0-10,3, Na2MoO4,2H2O 0,2-0,3, KJ 0,53-0,90, FeSO4,7H2O 25,0-30, 6, Na2EDTA, 2H2O 33,6-41,0, тіаміну гідрохлорид 0,15-0,25, пірідоксіну гідро-хлорид 0, 4-0,6, нікотінова кислота 0,4-0,6, мезо-інозіт 80-120, казеїну гідролізат 80-1204-, хлорофеноксі-оцтова кислота (А-СРА) 0,35-0,45, сахароза 23000-30000, агар 5800-6200рН, середовища до автоклавуванням 5,6-5,8, каллус Пасеря з інтервалом 30 діб. Номер Пасаж 19-й. [13]
Цітологічна и каріологічна характеристики штам . Тканина складається на 86-94% з клітін мерістематічніх типом круглої або овальної форми розміром у Середньому 57 х 67 мкм, и з клітін паренхімніх типом подовженої форми розміром у Середньому 80 х 160 мкм. Крива мітотічної актівності має одновершинная характер з максимумом на 9-й день культівування. Середнє число хромосом 56 ± 6 з варіацією від 24 до 190. Здатність до морфогенезу. Спостерігається Рідко спонтанний ризогенезу при збільшенні трівалості культівування калуса в пасажі до 1,5-2,0 місяців.
Характеристика біосінтезу гінзенозідів . Штам продукує гінзенозіді (глікозіді дамароновой групи) Rg1, Re, Rf, NG-R2, Rb1, Rc, Rb2, Rd в кількостях, порівнянніх з їх змістом до корінних плантаційній рослин. Гінзенозіді в середу культівування НЕ віділяються. Загальний вміст гінзенозідів (Rg1, Re, Rf, NG-R2, Rb1, Rc, Rb2, Rd) у калуса штам R1 4,3 ± 1,0 мг/г сухої масі.
У Колбі Ерленмейера ємністю 100 мл розлівають по 30 мл жівільного середовища следующего складу, мг/л води: NH4NO3400, KNO31900, CaCl2,2H2O 440, MgSO4,7H2O 370, KH2PO4170, H3BO36,2, MnSO4, 4H2O22,3, CoCl2,2H2O 0,025, CuSO4,5H2O 0,025, ZnSO47, H2O 8,6, Na2MoO4,2H2O 0,25, KJ 0,83, FeSO4,7H2O 27,8, Na2EDTA, 2H2O 37,3 тіаміну гідрохлорид 0, 2, пірідоксіну гідрохлорид 0,5; нікотінова кислота 0,5, мезо-інозіт 100, казеїну гідролізат 1004, хлорофеноксі-оцтова кислота (4-СРА) 0,4, сахароза 25000, агар 6000, рН до автоклавуванням 5,6. [13] .Колбі Із СЕРЕДОВИЩА автоклавують при 117оС течение 20 хв, потім охолоджують. На поверхню агару поміщають калуса штам R1 в кількості 0,5 г на шкірні колбу. Культуру інкубують у темряві при 25оС и відносної вологості Повітря 70% течение 30 діб. Потім калуса вітягують з колб и зважують. После ліофільної сушіння калусів в них визначаються Зміст гінзенозідів за методом, розроблення в Тихоокеанський інстітуті біоорганічної хімії ДВО АН СРСР (Маханьков В.В. Самошина Н.Ф. Малиновська Г.В. Атопкіна Л.М. Денисенко В.А. Ісаков В. В. Калиновський А.І. Уварова Н.І.) Аналіз глікозидів дамаранового ряду в природніх и синтетичніше сумішах методом вісокоефектівної рідінної хроматографії. (Хімія природніх Сполука, 1990, №1, с. 57-61) .Для цього суху біомасу штам R1 вічерпно екстрагують 70% -ним водним метанолом. Отриманий Упарене екстракт розчіняють у 70% водному метанолі. Отриманий Упарене екстракт розчіняють у воде и послідовно екстрагують спочатку пентаном, а потім насіченім водою н-бутанолом. Бутанольного частина упарюють при зниженя тиску до постійної ваги, потім розчіняють у метанолі. Отримання торбу гінзенозідів аналізують помощью мікроколончатого хроматографа «Міліхром» зі сталевими колонками 64 х 2 мм, заповненості сорбентом «Сферісорб» ОДС 5 мкм. Елююють градієнтом суміші ацетонітріл вода від 20:80 до 50:50. Година поділу 25 хв, витрати Розчинник 2,5 мл. Детектування елюата здійснюють при 204 нм.
Пріготування жівільного середовища
Завданн...
