тектування, реєстрації та обробки інформації, отриманої на приладі.
Справжність JIB методом ГЖХ можна підтвердити або за допомогою свідків, або методом щодо втримання. У першому випадку доказом ідентичності служить збіг часом утримування речовини-свідка і одного з компонентів суміші JIB при хроматографування кожного окремо в однакових умовах. У другому випадку речовина-свідок додають до проби, потім аналізують за рекомендованою методикою. Розраховують за формулою величину відносного утримування, яка є постійною для JTB в конкретних умовах. Кількісний аналіз виконують в тих же умовах, використовуючи для розрахунків такі параметри, як площа або висота піків ЛВ, Площа піків встановлюють на хроматограмі за допомогою планіметра, інтегратора або множенням висоти піка на його напівширину.
Високоефективна рідинна хроматографія (ВЕРХ) відрізняється від ГЖХ тим, що рухомою фазою служить не газ, а рідина, причому вона проходить через колонку, наповнену сорбентом, з великою швидкістю за рахунок значного тиску. Тому ВЕРХ дозволяє розділяти багатокомпонентні суміші на індивідуальні речовини високого ступеня чистоти. ВЕРХ відрізняється високою чутливістю (до Ю - 6 г). На поділ 10-15 компонентів затрачається 20-30 хв.
Рідинний хроматограф включає такі вузли, як дозатор, насос високого тиску, високоефективну колонку, детектор з реєструючим пристроєм. Колонки виготовляють з нержавіючої сталі, вони мають довжину 10-25 см, внутрішній діаметр 0,3-0,8 см і щільно набиваються адсорбентом з розміром частинок 5-10 мкм. В якості елюента використовують різні вуглеводні в поєднанні з етанолом. Детектором зазвичай служить спектрофотометр із змінною довжиною хвилі (190-900 нм), але існують також флуоріметріческіе, електрохімічні та інші детектори.
Справжність випробовуваних JIB підтверджують за часом виходу кожного компонента суміші з колонки, яке буде стабільно при однакових условиях проведення експерименту. Кількісний вміст розраховується за площею піку, яка пропорційна кількості ЛВ в пробі.
Електрофорез - метод аналізу, заснований на здатності заряджених частинок до переміщення в електричному полі. Швидкість переміщення іонів залежить від напруженості електричного поля, величини заряду, розміру частки, в'язкості, pH середовища, температури та інших факторів. Електрофоретична рухливість - величина, характерна для випробуваного речовини. Розрізняють абсолютну (вимірювану в сантиметрах в секунду) і відносну електрофоретична рухливість (відношення до рухливості стандартного зразка). За технікою виконання і аналітичним можливостям електрофорез на папері і в тонких шарах сорбенту схожий з ТШХ. Він дозволяє розділяти і ідентифікувати компоненти різних сумішей.
Глава 4.
. 1 Валідація методів аналізу
Валідація - це підтвердження обгрунтованості вибору методу аналізу для встановлення норм якості Л С по кожному розділу НД. Вона проводиться при підготовці проектів НД на нові ЛЗ або при подальшому перегляді НД. Валідації піддаються аналітичні методи, використовувані для ідентифікації ЛВ, встановлення вмісту в ньому різних домішок, кількісного визначення індивідуальних ЛВ та утримання їх у ЛФ, визначення допоміжних речовин і консервантів.
Валідація методу аналізу передбачає оцінку його специфічності, лінійної залежності результатів випробувань, аналітичної області методики, правильності, відтворюваності результатів, межі виявлення.
ревалідацію необхідна в тих випадках, коли відбулися зміни в синтезі ЛВ, у складі ЛЗ, в аналітичній методикою. Параметри аналітичного методу, встановлювані при його валідації та ревалідації, розраховуються у відповідності з існуючими правилами статистичної обробки результатів аналізу.
Специфічність методу аналізу обумовлює його здатність достовірно встановити наявність ЛВ в присутності інших компонентів (домішок, допоміжних речовин). Оцінка специфічності необхідна для методів, використовуваних при ідентифікації, визначенні домішок і кількісного вмісту Л В.
Лінійна залежність аналітичних сигналів від концентрації ЛВ встановлюється графічно. Оцінюється вона на підставі не менше 5 випробувань, виконаних за допомогою використовуваної аналітичної методики. Параметрами, підтверджуючими лінійну залежність, є коефіцієнт регресії, кут нахилу лінії регресії і залишкова сума площ.
Аналітична область методики охоплює інтервал між верхньою і нижньою межами змісту випробуваного речовини, в якому дотримується лінійна залежність. При цьому дана методика повинна забезпечувати визначення з необхідними відтворюваністю і точністю. Аналітична область виражається в тих же одиницях, що і результати випробувань за допомогою даної методики (відсотки, мільйонні част...
