Розгляд тест-хроматограм починають з форми отриманих піків. Піки повинні бути досить симетричними, не мати В«носівВ» і В«хвостівВ» - це найбільш частий дефект. Неприпустимо двоїння піків - свідчення наявності каналів або порожнин у колонці. Коефіцієнт асиметрії піків на 1/10 їх висоти повинен наближатися до 1, і для колонок хорошої якості повинен становити 0,8-1,3. Далі перевіряють час утримування тест-речовин на хроматограмах: сталість цієї величини свідчить про встановлення рівноваги у колонці і можливості розрахунку ефективності колонки. Розрахунок ефективності колонки - числа теоретичних тарілок і наведеної висоти еквівалентної теоретичної тарілки - проводять за відомими формулами (див. розд. 1.1). Для наявних у продажу сорбентів середнього якості при добре підібраній методиці набивання колонок вдається отримати значення ПВЕТТ від 3 до 6, що відповідає ЧТТ для стандартної колонки довжиною 25 см від 4 до 8 тис. (сорбент розміром 10 мкм), від 5,5 до 11 тис. (7,5 мкм) і від 8 до 16 тис. (5 мкм).
початківцю хроматографісту не слід засмучуватися, якщо параметри колонки, особливо ефективність і симетрія, виходять значно гірше. Це майже неминуче до тих пір, поки не буде придбаний досвід роботи.
1.5 ЗБЕРІГАННЯ, РЕГЕНЕРАЦІЯ ТА РЕМОНТ КОЛОНОК ДЛЯ ВЕРХ
Колонки для високоефективної рідинної хроматографії є ​​тонким інструментом, серцем хроматографа і вимагають дбайливого поводження. Помилка оператора перш все позначається на колонці; вона може повністю або частково втратити свої якості в результаті перевищення тиску, введення нефільтрованого розчинника або проби, необережного удару, занадто сильною затягування різьби і т.д. Тому правильному зберігання колонок, їх регенерації та ремонту необхідно приділяти увагу.
Почнемо з зберігання колонок. Фірми, що виробляють тестовані і не тестовані, а також порожні колонки для ВЕРХ поставляють їх у спеціальних коробках, які мають м'який пенополіуретановий вкладиш з гніздом для колонки або такі ж прокладки. Іноді колонку додатково поміщають в трубку із пластику й фіксують на кінцях тримачами. Кінці колонки герметично закривають заглушками різного типу, що запобігають висихання сорбенту. На самій колонці є специфікація, в якій дано каталожний і порядковий номер колонки, її розміри, сорбент і його грануляція, напрямок потоку розчинника та інші дані. Якщо колонка тестована, то в коробці лежить тест-хроматограмма з умовами випробування колонки і його результатами, якщо не тестована, то, як правило, інструкція з тестування.
Зберігати колонку бажано в коробці, в якій вона отримана; в ній же слід зберігати всю відповідну інформацію. Бажано перенумерувати всі колонки і на кожну завести паспорт, в якому слід відзначати всі види аналізів і розчинників, приблизну тривалість роботи, тиск при роботі та інші відомості. Зберігати всі коробки з колонками бажано в одному місці, надійно захищеному від ударів, вібрації, нагріву.
Перед початком експл...
