аного в якості позитивного контролю; позитивної ДНК клінічного зразка) приводить до ампліфікації в процесі ПЛР специфічного фрагмента ДНК і, як наслідок, до появі хибнопозитивних результатів. p> У процесі роботи можуть зустрітися два види контамінації:
1) перехресна контамінація від проби до проби (в процесі обробки клінічних зразків або за розкопуванні реакційної суміші), що призводить до появи спорадичних хибнопозитивних результатів;
2) контамінація продуктами ампліфікації (амплікони), що має найбільшу значення, тому в процесі ПЛР амплікони накопичуються у величезних кількостях і є ідеальними продуктами для реампліфікаціі.
Контамінація слідовими кількостями амплікон посуду, автоматичних піпеток та лабораторного обладнання, поверхні лабораторних столів або навіть поверхні шкіри співробітників лабораторії призводить до появи систематичних ложнопложітельних результатів.
Як правило, визначити джерело контамінації буває дуже важко і вимагає значних витрат часу і коштів. Накопичений до теперішнього часу досвід роботи лабораторій, що використовують метод ПЛР для діагностики дозволяє сформулювати основні вимоги до організації таких лабораторій та проведення самих аналізів. Дотримання даних вимог дозволяє виключити можливість контамінації та отримання хибнопозитивних результатів.
Необхідно територіально розділити різні стадії проведення аналізу, розміщуючи їх у окремих приміщеннях:
-Пре-ПЛР-приміщення, де проводиться обробка клінічних зразків, виділення ДНК, приготування реакційної суміші для ПЛР і постановка ПЛР (при наявності умов два останніх етапу рекомендується також проводити в додатковому окремому приміщенні). У цих приміщеннях забороняється проводити всі інші види робіт з інфекційними агентами, ПЛР-діагностика яких проводиться в даній лабораторії. p>-Пост-ПЛР-приміщення, де проводиться детекція продуктів ампліфікації. У цьому приміщенні допускається використовувати інші методи детекції інфекцій. Бажано кімнату детекції продуктів ампліфікації розташувати якнайдалі від пре-ПЛР-приміщень.
Робочі приміщення повинні бути оснащені ультрафіолетовими лампами з максимумом випромінювання в області 260 нм (типу ДБ-60) з розрахунку 2,5 Вт на 1 м3. Лампи повинні бути розташовані так, щоб прямому опроміненню піддавалися поверхні робочих столів, обладнання та матеріали, з якими має контакт оператор під час проведення ПЛР-аналізу. Опромінення необхідно проводити протягом 1 години до початку роботи і протягом 1 години після закінчення роботи.
Робота повинна проводитися в лабораторній одязі, замінної при переході з одного приміщення в інше, і в одноразових рукавичках, так як аналізовані біопроби є потенційно небезпечним інфікованим матеріалом. Обробка одягу з різних приміщень повинна проводитися окремо. Бажано, щоб на різних етапах проведення ПЛР-аналізу працювали різні співробітники.
Слід використовувати окремі набори дозаторів, пластикової та скляного посуду, лабораторно...
