, оскільки цей метод дозволяє уникнути складнощів, пов'язаних з вирощуванням таких мікроорганізмів у лабораторних умовах. Застосування ПЛР-діагностики також дуже ефективно щодо збудників з високою антигенною мінливістю та внутрішньоклітинних паразитів.
Слід відзначити, що методом ПЛР можливе виявлення збудників не лише в клінічному матеріалі, отриманому від хворого, але і в матеріалі, одержуваному з об'єктів зовнішнього середовища (вода, грунт і т.д.).
Обмеження методу ПЛР
1.Ампліфіціруется ДНК як живого, так і загиблого мікроорганізму. p> Це накладає певні вимоги при використанні ПЛР для контролю ефективності лікування. У загальному випадку подібний контроль повинен проводитися через проміжок часу, протягом якого відбувається повна елімінація збудника. Зазвичай цей інтервал складає 4-8 тижнів. p> 2.Можливість перехресної реакції.
Підбір праймерів відбувається на основі існуючих знань про геном даного і схожих мікроорганізмів. Теоретично існує можливість присутності такого ж фрагмента і у інших мікроорганізмів, геном яких на даний час не розшифрований, і які не були протестовані на можливість перехресної реакції. Присутність у пробі таких мікроорганізмів може призвести до хибнопозитивного результату аналізу. p> 3.Ізменчівость мікроорганізмів.
Хоча при конструюванні тест-системи фрагмент генома, використовуваний для ампліфікації, вибирається з високо консервативної області, мінливість мікроорганізмів може призводити до того, що деякі генотипи або штами досліджуваного збудника можуть набувати мутації в ампліфіціруемого ділянці геному, і, таким чином, ставати невловимими даної тест-системою.
Останні два пункти важливі для розробників ПЛР-діагностикумів. В даний час розроблені стандарти, що регламентують обсяг випробувань (включаючи перевірку на перехресні реакції, а також тестування відомих штамів визначається збудника), які повинна витримати тест-система, перш ніж вона потрапить на ринок. br/>
Основні принципи організації ПЛР-діагностичних лабораторій і вимоги до проведення ПЛР-аналізу
Роботи в ПЛР-лабораторії проводяться згідно:
- СП 3.1/3.2.558-96 "Загальні вимоги щодо профілактики інфекційних та паразитарних захворювань ";
- СП 1.2.731-99 "Безпека роботи з мікроорганізмами III-IV груп патогенності і гельмінтами ";
- методичним рекомендаціям МУ 1.3. 1888-04 "Організація роботи при дослідженнях методом ПЛР матеріалу, інфікованого патогенними біологічними агентами III-IV груп патогенності ";
- МУ 3.5.5.1034-01 "Знезараження досліджуваного матеріалу, інфікованого бактеріями III-IV груп патогенності, при роботі методом ПЛР ".
Проведення ПЛР-діагностики інфекцій пов'язано з проблемою, обумовленою високою чутливістю методу, - можливістю контамінації. Попадання в реакційну пробірку слідів кількостей позитивної ДНК (специфічних продуктів ампліфікації ДНК - амплікон; ДНК-стандарту, використовув...
