owrap valign=bottom>
CFP
pSG1192
YFP
pSG1193
В
В В
b)
<В
Ріс.11.a) Вектори, сконструйовані для отримання білків, злитих з флюоресцирующими білками. MCS - різні полілінкерамі; ori - реплікативний регіон; f1 ori , місце початку генерації одноцепочечной ДНК; Cm , Amp, Spc - гени стійкості до хлорамфеніколу, ампіциліну та спектиноміцину, відповідно. FP - ген флуоресцентного білка (тип флуоресцентного білка вказаний в таблиці під відповідним вектором; для pSG1164: FP = gfp mut1 ; pSG1170: FP = gfp uv ). lacZ - ген b-галактозидази; lacI - Ген репрессора lacI; amyE - сайти інтеграції в хромосому; P xyl і P spac - ксилози-залежний і IPTG-залежний промотори, відповідно; P pen - промотор пеніцилінази; b) вектор pSG1170, призначений для проведення злиття білка клітинного ділення DivIVA з GFPuv, після інтеграції в хромосому.
Для перевірки ефективності роботи векторів, вектор pSG1170 був використаний для виявлення локалізації білка DivIVA, що бере участь у виборі сайту ділення (ріс.11b). Як і передбачалося, білок локалізувався на обох полюсах і в центрі діляться клітин.
Було отримано ряд похідних даних векторів заснованих на блакитному (CFP, cyan fluorescent protein) і жовтому (YFP, yellow fluorescent protein) спектральних варіантах GFP, а також червоному флуоресціюючому білку (DsRed), які не є похідним GFP (Feucht A., Lewis., 2001). У першу чергу вони були створені для проведення більш ефективного множинного мічення клітин.
Вектори pSG1186 ( cfp ), pSG1187 ( yfp ) і pSG1194 (dsRed) (ріс.11a) є похідними pSG1151 з наступними змінами: (i) гени флуоресцентного білка з підвищеним зміст GC пар; (ii) змінено полілінкерамі, розташований проксимальніше гена флуоресцентного білка; (iii) додатковий кодон GTG відразу після старт-кодону гена флуоресцентного білка.
Вектори pSG1190 ( cfp ) і pSG1191 ( yfp ) є похідними pSG1729 з наступними змінами: (i) гени флуоресцентного білка з підвищеним зміст GC пар (ii) додатковий кодон GTG відразу після старт-кодону гена флуоресцентного білка. Полілінкерамі без змін.
Вектори pSG1192 ( cfp ) і pSG1193 ( yfp ) є похідні pSG1154 із зміненим полілінкерамі (Як у pSG1186 і pSG1186) і додатковим кодоном GTG відразу після старт-кодону гена флуоресцентного білка.
Дані вектори були використані для подвійного мічення спорулирующих клітин. Була прямо відображено послідовна агрегація/дез...
