- Реакція гемаглютинації (РГА)
- Реакція гальмування гемаглютинації (РГГА)
Імуноферментний аналіз (ІФА)
Реакція нейрамінідази (РИНА)
Реакція нейтралізації (РН)
Виділення вірусу
- Реакція на курячих ембріонах
- Культура клітин MDCK, Vero
Молекулярно-генетичні дослідження
- Полімеразна ланцюгова реакція (ПЛР)
- Реал-тайм ПЛР
Розшифровка геному вірусу
Електронно-мікроскопічні дослідження
- Вивчення морфології вірусу
Електронно-мікроскопічне фотографування РДА
Для ідентифікації вірусу в патологічному матеріалі можна використовувати РДА. Надосадову рідину після центрифугування суспензії проб з органів і тканин хворий птахів, а також змивів досліджують у крапельної або пробирочную РДА з 1% суспензії еритроцитів курей або 0,5% суспензією еритроцитів морської свинки. Реакцію враховують через 20 хвилин і 1:00. Специфічність визначають в РГГА [35].
Ідентифікацію випробуваного вірусу проводять з набором еталонних штаммоспеціфіцескіх грипозних сироваток до його антигенним варіантами. Для диференціації в реакцію вводять сироватку проти вірусу БН. РГГА ставлять мікро- або макрометодом за загальноприйнятою методикою [36].
Малюнок 16 - Лабораторна діагностика пташиного грипу
Діагностика грипу комплексна з обов'язковим виділенням, ідентифікацією вірусу і постановкою біопроби. Для ретроспективної серологічної діагностики використовують РЗГА. Для серологічних досліджень використовують РДП, РНГА, МФА, РСК, а також метод імуноферментного аналізу (ІФА), призначений для експрес титрування антитіл до вірусу ДП по гемаглютиніну і нейрамінідазі.
При проведенні імуноферментного аналізу (ІФА) використовують обладнання, показане на малюнку 17. На малюнку 18 показані схеми проведення ІФА.
Малюнок 17 - Обладнання для проведення ІФА
Малюнок 18 - Схеми методу ІФА
Схема методу ІФА подвійних антитіл сендвіча для визначення антигену
Схема непрямого методу ІФА для визначення антитіл
У полімеразою ланцюгової реакції (ПЛР) - визначають геном вірусу, виявлення вірусної нуклеїнової кислоти в пробах патологічного матеріалу та в аллантоісной рідини заражених курячих ембріонів, а також для диференціації антигенних підтипів вірусу. При постановці реакції використовують наступні обладнання (малюнок 19):
Малюнок 19 - Обладнання для ПЛР
2.3 Результати власних досліджень
Враховуючи епізоотичну ситуацію по даному захворюванню в Казахстані за попередні роки, а також світову ситуацію ймовірність виникнення епізоотії залишається високою. Основна загроза у поширенні відводиться диким перелітним птахам, особливо качки, гусака, лебедю (малюнок 20).
Весняний міграційний потік перелітних птахів на територію Сибіру проходить через Казахстан за трьома основними напрямками (малюнок 21) - з Африканських і Південно-Європейських зимівель охоплює території Західно-Казахстанської, Атирауської, Мангістауської?? бластів; з пакистанських зимівель міграція проходить через південні і центральні області Казахстану; з індійських зимівель потік охоплює східні та північні регіони Республіки. Осіння міграція проходить тими ж шляхами.
Малюнок 20 - Шляхи міграції птахів у світі
Малюнок 21 - Основні ділянки міграційних потоків птахів
Всю міграцію можна розділити на три етапи - рані прилітні птиці, середньо і пізні прилітні також як і рані відлітні, середньо та пізні відлітні. Дана обставина залежить від режиму температури повітря навколишнього середовища. Весняний проліт рані прилітній птиці, в яку входять найбільш схильні Вірусоносійство види - качка, гусак, лебідь відбувається, коли середньо добовий показник температури повітря припадає на інтервал 5-10єС. Масовий приліт припадає приблизно на двадцяті числа лютого в Південних областях Казахстану і в другій декаді квітня в північній частині.
Навесні відбувається занос латентної інфекції при посередництві вірусоносіїв, в липень-вересень місцях відбувається природний пасаж вірусу через організм водоплавних птахів, посилення вірулентності і розвиток інфекції. У зв'язку з цим, Національним центром моніторингу, референції, лабораторної діагностики та методологи у ветеринарії була продовжена і роз...
