Да після обробки протеиназой До зіскрібка тканини мигдалеподібних залоз досі використовується при діагностиці пріонних захворювань.
На підставі були до 1982 експериментальних даних С. ??Прузінер сформулював пріонну концепцію. Ця концепція передбачала наступне:
інфекційним агентом є білок PrPSc,
інфекційний агент PrPSc може реплікувати себе в відсутність нуклеїнової кислоти,
перетворення білка з нормальної форми (PrPC) в інфекційну (PrPSc) відбувається шляхом конформационного переходу,
конформаційний перехід PrPC в PrPSc може відбуватися
спонтанно, приводячи до спорадичним формам пріонних хвороб. Він може бути викликаний надходженням в організм патологічної форми PrPSc ззовні (набуті форми поранених захворювань). Нарешті, перехід може статися через мутацій в гені Prnp, що сприяють утворенню PrPSc з PrPC (спадкові форми пріонних захворювань).
До теперішнього часу концепція пріонів отримала переконливі експериментальні підтвердження. Якщо розмноження PrPSc після потрапляння в організм відбувається шляхом наведення патологічної конформації на PrPC, то організми, позбавлені PrPC, повинні бути стійкі до пріонної інфекції. Це і було показано з використанням трансгенних мишей, гомозиготних по делеції гена Prnp (Prnp0/0). Введення гомогенату мозку мишей, хворих скрейпі, трансгенним мишам Prnp0/0 не приводило до розвитку хвороби через відсутність нормального PrPC. Більше того, виявилося, що за відсутності PrPC не відбувається не тільки реплікації приона, але і пошкодження нервової тканини. PrPC також необхідний для транспорту інфекційного агента периферичними нервами до центральної нервової системи.
Остаточне доказ концепції пріонів довгий час стримувалося неможливістю отримання значної кількості PrPres - форми PrPSc, утвореною in vitro, яка стійка до часткового протеолизу і здатна викликати хворобу при введенні експериментальним тваринам. Нещодавно було показано, що фрагмент рекомбінантного PrP миші з 89 по 231 амінокислоту, експресуватися в Escherichia coli, утворює амілоїдні фібрили in vitro, які при введенні трансгенним мишам, експресуючих цей же фрагмент PrP, призводять до розвитку неврологічної картини пріонного захворювання.
Розробка системи циклічної ампліфікації пріонної форми
білка PrP, за допомогою якої можливе формування значного кількості PrPres in vitro, дозволила отримати і продемонструвати її інфекційність. Початковою матрицею для утворення білка PrPres служив PrPSc - патологічний білок з гомогенату мозку хом'яків, заражених скрейпі. Інкубація мінімальної кількості PrPSc (гомогенат мозку хом'яків, хворих скрейпі, розводили в 104 разів) з надлишком PrPC приводила до утворення агрегатів PrPres. Агрегати PrPres руйнували ультразвуком на більш дрібні, розводили в 10 разів суспензією, що містить надлишок PrPC, і інкубували знову. У результаті багато разів повтореного циклічного процесу, що включає інкубацію PrPres з PrPC, руйнування агрегатів ультразвуком і подальше розведення, досягалося зменшення змісту вихідного інфекційного агента в реакційній суміші від 104 раз (у першому циклі) до 1 055 разів (у заключному). Освіта PrPres в першому циклі відбувалося на матриці PrPSc, у наступних циклах перетворенню PrPC в інфекційну форму сприяв PrPres, отриманий in vitro. Біохімічні та структурні властивості PrPres виявилися такими ж, як властивості PrPSc, ізольованого з мозку хворих тварин. Інтрацеребральні введення PrPres здоровим хом'якам индуцировало у них скрейпі і призводило до смерті. Гістологічний аналіз мозку померлих тварин показав губчасту дегенерацію нервової тканини, невідрізниму від такої у тварин, заражених PrPSc, утвореним in vivo. Однак виявилося, що PrPres набагато менш інфекційних, ніж патологічний білок, що продукується in vivo. Причини таких розходжень у інфекційності поки не з'ясовані.
Метод циклічної ампліфікації пріонного інфекційного агента ефективний для діагностики губчастих енцефалопатій людини, оскільки дозволяє детектувати PrPSc в тканинах і біологічних рідинах людини на ранніх стадіях розвитку хвороби.
Передача пріонної інфекції між видами ссавців обмежена міжвидовими бар'єрами. Губчасті енцефалопатії передаються між особинами одного виду або особинам близькоспоріднених видів. Наприклад, хвороба Крейцфельда-Якоба передається від людини людині, і від людини шимпанзе; скрейпі ж передається серед овець і кіз, але не передається шимпанзе. Також невідомі випадки зараження скрейпі людини. У той же час міжвидові бар'єри не абсолютні. Наприклад, можливе зараження хом'яків скрейпі і кіз хворобою Крейцфельда-Якоба. Міжвидові бар'єри можуть виражатися не стільки в неможливості передачі інфекції тваринам віддаленого виду, скільки в подовженні інкубаційного періоду, ...
