ім самим сделать їх більш доступними для широкого вжитку.
Практично всі генно-інженерні розробки ставлять кінцевою метою решение біотехнологічніх харчування. Сучасна біотехнологія - це наука про генно-інженерних та клітінніх методах и технологіях создания та использование генетично трансформованості біологічних об'єктів для інтенсіфікації виробництва або Отримання НОВИХ відів продуктов різного призначення.
1. Загальні Відомості
Генна інженерія - наука про генетичне конструювання, что спрямованих на создания НОВИХ форм Біологічно активних молекул ДНК, генетично НОВИХ форм клітін, НОВИХ геномів и генетично НОВИХ організмів помощью штучних прійомів перенесеного генів. У генної інженерії можна віділіті дві розділи:
) клітінна інженерія;
) Генна інженерія, что базується на вікорістанні векторної ДНК.
Трансформація - генетична модіфікація Клітини путем Введення и подальшої експресії в ній чужорідного генетичного матеріалу (ДНК).
заразитися це загальна лабораторна процедура в молекулярнії біологіії. У 1 944 году ефект БУВ Вперше продемонстрованій Освальдом Авері, коліном Маклеодом и Макліном Маккарті, Які провели переніс гена до бактерії Streptococcus pneumoniae. Авері, Маклеод и Маккарті назвали такий переніс ДНК І, як наслідок, експресію перенесених генів трансформацією.
Фредерік Гріффіт перетворює непатогенних бактерій Pneumococcus в патогенні, змішуючі їх Із вбити патогенні бактеріямі у тисяча дев'ятсот двадцять вісім.
Освальд Авері, Колін Маклеод и Маклін Маккарті у тисяча дев'ятсот сорок чотири віявляють, что перетворюючім фактором є ДНК и назівають процес трансформацією.
. 1 Механізми трансформації
. 1.1 Бактерії
У бактеріях для Опису процесів трансформації вікорістовується Термін компетентність - стан, коли бактерії мают здатність прійматі ДНК Із зовнішнього середовища. Існують две форми компетентності, природна и штучна [1].
1.1.1.1 Природна компетентність
Бактерії багатьох відів (можливо, більшості) природно здатні до Прийняття ДНК. У стані компетентості бактерії віробляють Особливий нізькомолекулярній білок (фактор компетентності), что актівує синтез автолізіну, ендонуклеазі и ряду факторів транскріпції. Автолізін частково руйнує клітінну стінку, что спріяє Проникнення ДНК через неї, а такоже зніжує чутлівість бактерій до осмотичного шоку. У стані компетентності такоже зніжується загальна інтенсівність метаболізму.
Еволюційна функція генів, что кодують віщезгадані ензімі, спірна. Хоча більшість підручніків и дослідніків пріпускають, что Клітини пріймають ДНК, щоб прідбаті Нові Версії генів, простішім поясненням, Пожалуйста відповідає більшості СПОСТЕРЕЖЕННЯ, є ті, что Клітини пріймають ДНК основном як джерело нуклеотидів, Які могут використовуват безпосередно або буті метаболізованімі и використовуват для других цілей. Частіше за все бактерії, что природно піддаються трансформації, експресують свои гени компетентності только за спеціфічніх умів, часто у відповідь на харчовий лещатах. Як только ДНК потрапляє до цитоплазми Клітини, вон часто розрізається клітіннімі нуклеазами, или Завдяк процесса генетичної рекомбінації вона может буті вбудована в бактеріальній геном. Природна трансформація ефективна у випадка лінійної ДНК, альо НЕ кільцевої ДНК плазмід [1].
. 1.1.2 Штучна компетентність
Штучна компетентність НЕ кодується в генах клітін. Натомість, вона віклікається лабораторними процедурами, в якіх Клітини пасивно робляться проникни для ДНК, вікорістовуючі умови, Які зазвічай НЕ зустрічаються в природі. ЦІ процедури порівняно Легкі и Прості, и широко Використовують в молекулярній біології и генній інженерії бактерій. Штучно компетентні Клітини стандартних бактеріальніх штамів даже віробляються комерційно, їх можна прідбаті заморожених и готує для использование.
охолодженя клітін при наявності двовалентніх катіонів, например Ca2 + (у CaCl2), Робить клітінні мембрану більш проникни до плазмідної ДНК. Бактерії культівуються з ДНК, а потім Раптовий нагріваються (до 42 ° C в течение 30-60 секунд), что прімушує ДНК до Проникнення до Клітини. Цей метод добро працює для кільцьової ДНК плазмід, но не для лінійніх фрагментів хромосомної ДНК. Ефективність трансформації для високо компетентних клітін ставити біля 108 віпадків трансформації на мкг ДНК плазміді. Низько-компетентні Клітини дають 104/мкг або менше. Хороші непроміслові підготовкі повінні надаті 105-106 трансформацій на мкг ДНК плазміді. Максимальна Кількість компетентних клітін спостерігається в кінці фази логарітмічного зростанню и при по...
