ощенієм і концентрацією поглинаючої речовини [18].
Дуже рідко фотометрирование проводять відразу ж після переведення аналізованої проби в розчин, так як величина поглинання в цьому випадку буває дуже незначна і неможливо визначати малі кількості речовини. Тому на практиці визначається компонент зазвичай перекладають в з'єднання, що володіє значним поглинанням, і прагнуть використовувати апаратуру, яка дає можливість проводити вимірювання в області його максимуму поглинання. Найчастіше визначається елемент переводять у комплексне з'єднання з різними органічними реагентами.
При виборі реагенту для визначення якогось елемента слід враховувати насамперед його селективність, а також чутливість визначення, яка може бути при цьому досягнута. Селективність реагенту у фотометричному методі визначається в першу чергу можливістю знайти область спектра, в якій поглинає випробний з'єднання, вільну від накладення поглинання сторонніх компонентів, присутніх у розчині. Крім того, слід прагнути підібрати специфічні умови проведення реакції, в яких утворюється комплексна сполука тільки визначається елемента. Оптимальні умови визначення вимагають повного зв'язування визначається елемента в комплекс.
Оптимальні умови утворення комплексної сполуки будуть залежати не тільки від надлишку реагенту, але також від рН розчину, особливо в тому випадку, коли використовуваний реагент є слабкою кислотою. У тих випадках, коли комплексне з'єднання відрізняється малою міцністю, для зсуву рівноваги в бік більш повного освіти комплексного з'єднання використовують органічні розчинники: спирт, ацетон, або екстрагують його в шар органічного розчинника, незмішувані з водою (екстракційно-фотометричний метод). Крім того, поглинання самого органічного реагенту дуже часто змінюється зі зміною кислотності розчину, що слід враховувати при виборі оптимальної довжини хвилі для вимірювання поглинання комплексу [9].
За забарвленням розчинів забарвлених речовин можна визначати концентрацію того чи іншого компонента або візуально, або за допомогою фотоелементів - приладів, що перетворюють світлову енергію в електричну. Відповідно до цього розрізняють фотометричний візуальний метод аналізу, званий часто колориметричним, і метод аналізу із застосуванням фотоелементів - власне фотометричний метод аналізу. Фотометричний метод є об'єктивним методом, оскільки результати його не залежить від здібностей спостерігача, на відміну від результатів колориметрического - суб'єктивного методу. Обидва методи засновані на пропорційній залежності між светопоглощенієм і концентрацією поглинаючої речовини.
Поглинання у видимій областях спектру пов'язано в основному з збудженням електронів. Чинниками, які зумовлюють поглинання світла досліджуваними речовинами, є наявність в їх молекулах так званих хромофоров. Хромофори - ненасичені групи атомів, які обумовлюють колір хімічної сполуки. У той же час хромофори поглинають електромагнітне випромінювання незалежно від наявності забарвлення.
Розчинник не повинен поглинати світло в тій області спектра, що і досліджувана речовина. Характер спектра може змінюватися в різних розчинниках, а також при зміні рН середовища.
Кожна функціональна група в молекулі речовини характеризується поглинанням світла в певній області спектра, що і використовується для цілей ідентифікації та кількісного визначення речовини в лікарському засобі [15].
Метод абсорбційної спектрофотометрії у видимій області спектра включений в ГФ XI та МФ III, а також в останні видання фармакопеї майже всіх країн для визначення автентичності, чистоти і кількісного визначення речовини в ЛС [5, 11].
2. Прилади й компоненти для фотометричного аналізу
Фотометр - оптичний прилад, що дозволяє вимірювати світловий потік на фіксованих довжинах (діапазонах) хвиль. Основні компоненти одноканального (однопроменевого) фотометра показані на малюнку 1.
Малюнок 1 - Основні компоненти одноканального фотометра
Світло від джерела випромінювання проходить через вхідну щілину і потрапляє на світлофільтр, який пропускає вузьку область спектра, необхідну для вимірювання. Світло потрапляє на кювету з зразком, частково, в залежності від кількості досліджуваної речовини, поглинається в кюветі. Минулий через кювету світло відділяється на вихідний щілини від розсіяного світла. На фотоприемнике світловий потік перетворюється в електричний сигнал, який вимірюється мікропроцесором. Величина пройшов через кювету світла залежить від складу і кількості речовини в кюветі. У одноканальному фотометре вимір холостий проби, калібратора, досвідчених проб і контролів вимірюється послідовно, в двоканальному фотометрі вимір може проводитися за схемою компенсації, тобто постійн...
