10 ) 4 ], який при взаємодії з відновником дає синє забарвлення в кислому середовищі, молибденовую синь. Інтенсивність забарвлення пропорційна кількості фосфорної кислоти, що міститься в розчині. Реакція протікає в кислому середовищі:
В
Молібденова синь в розчині знаходиться в колоїдному стані, легко адсорбується поверхнево-активними речовинами. Перед фотометрірованія не можна фільтрувати вже забарвлені розчини. p align="justify"> Від природи відновлювача залежить швидкість реакції відновлення і чутливість методу. Якщо в досліджуваному розчині міститься білок, то необхідно його попередньо видалити. p align="justify"> Для цього в досліджуваний розчин додають розчин трихлороцтової або хлорної кислоти. Розчин добре перемішують, осад білка видаляють фільтруванням або центрифугуванням. Якщо в розчині присутні кіслотолабільного фосфорні сполуки, то фільтрування або центрифугування проводять на холоді, а кислоту з безбілкового розчину видаляють. Від трихлороцтової кислоти можна звільнитися шляхом повторного струшування розчину з 5 - 10-кратним об'ємом насиченого водою ефіру. Трихлороцтової кислота переходить при цьому в ефірну фракцію. Після струшування і відстоювання ефір відсмоктують водоструминним насосом. Хлорне кислоту видаляють у вигляді калієвої солі (КСlO 4 ), що утворюється при нейтралізації розчину 5н. розчином КОН. Замість видалення кислот безбілковий розчин можна просто нейтралізувати розчином NaOH. При цьому необхідно визначити кінцевий обсяг проби. Фосфат визначають прямо з отриманого безбілкового розчину.
Найбільшого поширення серед колориметричних методів визначення фосфору отримав метод Фіске - Суббароу. Проте в ході проробленої роботи використовувався інший метод: Лоурі і Лопесу в модифікації Скулачова - характеризується більш високою чутливістю, ніж інші колориметрические методи, і що дозволяє визначити від 0,3 до 6 мкг Р в 1 мл колоріметріруемого розчину. br/>
.2.1 Метод Лоурі і Лопесу в модифікації Скулачова
Принцип цього методу полягає в перетворенні фосфорномолібденового комплексу в В«синьВ» під дією аскорбінової кислоти. Прискорення реакції і підвищення чутливості методу досягаються присутністю іонів міді в інкубаційному середовищі. Цей метод застосовують у тих випадках, коли в аналізованої витяжці, крім неорганічного фосфору, присутні лабільні органічні фосфорсодержащие з'єднання. Відновлення фосфорномолібденового комплексу проводиться при більш низькій кислотності середовища (рН 4), ніж у методі Фіске-Суббароу (рН 0,65). У таких умовах лабільні фосфорні сполуки більш стійкі. p align="justify"> Реактиви (готують на бидистилляте):
) 0,1 М ацетатний буфер з рН 4;
) 1% - ий розчин молібденовоки...
