групами. При змішуванні таких предполімер з яким-небудь водним розчином, наприклад клітинної суспензією, гель утворюється протягом декількох хвилин. У присутності води предполімер уретану реагують один з одним з утворенням карбаматних зв'язків. Іммобілізовані даними способом клітини Lavandula vera використовували для отримання пігменту.
Для іммобілізації рослинних клітин можна використовувати мембрани різної конфігурації. Вперше іммобілізація рослинних клітин даним методом була продемонстрована на порожнистих трубчастих реакторах. Рослинні клітини наносять на зовнішню поверхню порожнистої трубки і через неї з відносно високою швидкістю прокачують збагачену киснем живильне середовище. При вивченні модельної системи було показано, що в підлогою трубчатом реакторі іммобілізовані клітини Glycine max продукують фенольні сполуки з постійною швидкістю протягом 700 ч.
.2 Адсорбція
Іммобілізація за допомогою адсорбції на твердих носіях є дуже м'яким методом. Однак до теперішнього часу його не використали для іммобілізації рослинних клітин. Для адсорбції рослинних протопластів використовували мікроносії. Рослинні протопласти, адсорбовані на поперечно-зшитому декстранами, зберігали свою життєздатність.
.3 Ковалентне зв'язування
Метод ковалентного зв'язування клітин мікроорганізмів з твердим носієм застосовують досить рідко. Що ж до його використання у випадку рослинних клітин, то відомий тільки один приклад ковалентного зшивання клітин Solanum aviculare з нерозчинної матрицею з поліфеніленоксіда. Носій активували глутаровий альдегідом, і після видалення надлишку глутарового альдегіду гель додавали до суспензії рослинних клітин. Іммобілізовані клітини використовували стовпчики реакторі для здобуття стероїдних глікозидів протягом 11 діб.
іммобілізація рослинний клітина
2. Життєздатність іммобілізованих рослинних клітин
У більшості випадків необхідно, щоб рослинні клітини після іммобілізації зберігали життєздатність. Це особливо важливо, коли в процес синтезу de novo залучені всі шляхи метаболізму клітини.
.1 Фарбування
Фарбування флуоресцеіндіацетатом (ФДА) часто використовують для визначення життєздатності клітин. Після адсорбції ФДА клітинами при наявності естеразной активності він деацетилюється і стає флуоресціюючим. Пофарбовані клітини розглядають за допомогою мікроскопа, забезпеченого УФ-джерелом світла.
Виражене у відсотках відношення клітин, що знаходяться в даний момент часу на будь-якій стадії мітозу, до їх загального числа в популяції називають мітотичним індексом (МІ). За його зміні протягом інкубації можна судити про життєздатність клітин. Зручним барвником для фарбування хромосом після фіксації є карбол-фуксин
.2 Дихання
Про життєздатність клітин судять по їх диханню, яке можна вимірювати протягом інкубації через різні проміжки часу. Вимірювання проводять за допомогою кисневого електроду Кларка за наступною стандартною методикою. Клітини, суспендовані в середовищі (сира вага 100-200 мг), або відповідну кількість іммобілізованих клітин (загальний обсяг 5 мл) інкубують при 25 ° С. G допомогою самописця ре...
