гідроксилювання). Для збереження биосинтетической активності велике значення має життєздатність клітинних препаратів, тому застосовувалися різні методи іммобілізації і вивчалася життєздатність і біосинтетична активність одержаних препаратів.
. Методи іммобілізації рослинних клітин
Рослинні клітини досить чутливі до змін навколишнього середовища, і, отже, для іммобілізації можуть бути використані тільки найбільш м'які методи.
Встановлено, що для великих чутливих рослинних клітин найкращим із широко використовуваних методів іммобілізації є включення в гель. Відомі також приклади іммобілізації рослинних клітин методами адсорбції та ковалентного зшивання. Іммобілізацію рослинних клітин проводять у стерильних умовах, оскільки рослинні клітини ростуть відносно повільно і, отже, дуже чутливі до зараження швидко зростаючими клітинами мікроорганізмів. У зв'язку з цим використовуваний для іммобілізації носій повинен витримувати відповідну обробку, наприклад автоклавирование.
.1 Включення в гель
Для іммобілізації рослинних клітин шляхом включення в гель можна використовувати кілька різних методик. Кінцева концентрація іммобілізованих клітин у препараті може варіювати в широких межах (від декількох відсотків до 50% (за вагою) і вище). Оптимальну концентрацію клітин потрібно визначати окремо для кожного конкретного випадку. Для іммобілізації клітин різних типів, у тому числі рослинних, широко використовують альгінат кальцію. Умови включення в гель альгінату кальцію дуже м'які, полімер можна стерилізувати автоклавуванням, і крім того, процес іммобілізації звернемо, що досягається додаванням агента, що зв'язує кальцій (наприклад, ЕДТА або лимонної кислоти). Кінцева концентрація альгінату в препараті іммобілізованих клітин може бути різною залежно від типу використовуваного альгінату. Стабільність гелю зростає із збільшенням концентрації полімеру, але при високих концентраціях альгінату суспензія альгінат / клітини стає дуже в'язкою, що може утруднити процес утворення гранул.
х-Каррагинан є полісахарид, що містить сульфоефірние групи (сульфованих більше 20% залишків цукру) і не розчинний у холодній воді. Однак при нагріванні він розчиняється, а при наступному охолодженні утворює гель. Температура освіти і якість гелю залежать як від концентрації полімеру, так і від кількості та типу присутніх у розчині катіонів (наприклад, K +, NH4 +, Ca2 + або Ba2 +).
Агар і агароза (очищений препарат агару) утворюють гелі при охолодженні гарячого розчину. Для зниження температури гелеобразованпя агарозу можна хімічно модифікувати введенням гідроксіетільних груп. Оптимальна температура гелі-освіти при іммобілізації рослинних клітин 25-30 ° С. Перевагою гелю агарози є те, що він стабільний у відсутність противоионов. Останнім часом для іммобілізації клітин мікроорганізмів широко застосовують поліакриламід. Однак деякі речовини, використовувані при радикальній полімеризації акриламіду, токсичні для рослинних клітин. Були розроблені методи, що дозволяють зменшити токсичність акриламіду та інших реагентів, що дозволило отримати життєздатні рослинні клітини, іммобілізовані в поліакриламідному гелі.
Для іммобілізації біокаталізаторів можна використовувати предполімер уретану з кінцевими функціональними ізоціанатними...
