вдомногослойний епітелій нюхових ямок показав схожу структуру з нюховим епітелієм дорослого лосося (Fig. 1F). На 70 день ембріона (день вилуплення), компоненти клітин нюхових ямок можна розділити на 4 типи (ОРК, базальні клітини, що підтримують епітеліоцити і келихоподібних клітини; Fig. 1Н). Нюхові ямки і носові порожнини високо розвинені однак, формування ніздрів ще не було закінчено (Fig. 1G). Ці результати були занесені в таблицю 1.
Імуногістохімічні зміни в soGST в нюхової системі в процесі онтогенетичного розвитку.
Використовуючи імуногістохімічні методики, ми домоглися того, що ОРК, які були гістохімічно обнаружаеми НЕ еспрессіровалісь в soGST аж до 52 дня. soGST-іммунореактіви були вперше виявлені в перинуклеарной цитоплазмі цих клітин на 55 день життя ембріона (Fig. 2А). До цього часу не було виявлено soGST-іммунореактівов в передбачуваних нюхових нервових пучках. На 58 день, число soGST-імунореактивних клітин в нюхових ямках різко збільшилася; а сильна soGST-иммунореактивность була виявлена ??в дендритні і перінуклеальной цитоплазмі ОРК (Fig. 2В). У той же час, soGST-Иммунореактивность аксони були виявлені в нюхових нервових пучках і нюхових ямках (Fig. 2С, D). Ці аксони входять в ростральну частина нюхових ямок (Fig. 2D). soGST-іммунореактіви були повністю видалені методом попередньої адсорбції (не було отримано даних). Ці результати занесені в хронологічному порядку в таблиці 1 і схематично позначені в Figунке 3.
Взаємозв'язок між GST експресією і клітинної проліферацією ОРК.
Нюховий епітелій однорічного лосося проявив БДУ иммунореактивность в ядрах (Fig. 4,5). Ці БДУ-Иммунореактивность були классіфіціоровани як горизонтальні і кулясті базальні клітини, і підтримуючі епітеліоцити на 12:00 після маркування БДУ ин віво. Ці БДУ-іммунореактіви були переважно виявлені як в горизонтальних, так і в кулястих базальних клітинах (Fig. 4А). На 3 день після маркування, БДУ-Иммунореактивность клітини, які знаходяться поблизу проміжного шару нюхового епітелію почали ділитися (почалося зростання чисельності). Ці клітини були визначені як молоді ОРК, через їх місцезнаходження (Fig. 4С).
Аналіз дзеркальних секцій нюхового епітелію показав, що иммунореактивность для soGST є як у цитоплазмі, так і в аксонах ОРК, але немає в підтримуючих епітеліоцитах, келихоподібних клітинах, так само як її немає і в горизонтальних і кулястих базальних клітинах (Fig. 5А). Иммунореактивность для БДУ спостерігалася в ядрах нюхових нервових пучків в дзеркальній секції по Figунку 5А (Fig 5В). ОРК, в яких існує иммунореактивность як для soGST, так і для БДУ була вперше помічена на 7 день після маркування. На 60 день після маркування, ці іммунореактіви рівномірно розсіялися по усьому обонятельному епітелію.
Обговорення
Ця наукова робота надає першу иммуногистохимический аналіз онтогенетичної експресії GST субоедениц в нюхової системі риб. У попередніх роботах про нюховому епітелії гризуни, иммунореактивность GST класу альфа і мю була знайдена в підтримуючих епітеліоцитах і ацинарних клітинах залоз Боумена у дорослих щурів (Bangeret al. 1994). Иммунореактивность GST класу пі була виявлено в нюховому епітелії на жодному з досліджуваних етапів розвитку (Krishna et al. 1994). Однак, GST класу пі був виражений у ОРК лосося (Starcevic and Zielinski 1995; Kudo et al. 1999). Ця різниця в вираженості GST між ссавцями і костистими рибами - нинішній питання. Слід вивчити, чи так це, що soGST регулюється експресією нюхового нейронного активатора транскрипції (НАТ - 1) в ОРК лосося; бо НАТ - 1 регулює експресію безлічі генів відповідають за ОРК у ссавців (Wang et al. 1993). Нинішнє дослідження зафіксувало появу soGST після диференціації ОРК в нюхових ямках на 55 дні, і не знайшло жодних значних відмінностей між локалізацією soGST у дорослого і молодого (після 55 дня) нюхового епітелію. Zielinski and Hara (1988) виявили, що після диференціювання, війчасті ОРК можуть реагувати на амінокислоти у ембріонів райдужної форелі; за допомогою ультраструктурного і електрофізіологічного аналізів. Ці відкриття вказують на те, що soGST синтезується в дорослих ОРК після клітинної диференціації в процесі онтогенезу. Подібним чином, нюхові маркерний білок (ОМБ) виділявся в дорослих ОРК після організації сенсорних синапсів в нюхових ямках ембріона миші (Farbman and Margolis 1980; Monti-Graziadei et al. 1980). Більш того, даний таймінг експресії soGST увазі, що функції ксенобіотиків для речовин із зовнішнього середовища, потрібні після вилуплення, були надані цим клітинам ще в яйці.
У жабах і гризунах, аналіз клітинних оборотів був представлений моніторингом клітинної проліфераіі, з використанням тимідину (Graziadei and Metcalf 1971; Graziadei and Monti-Graziadei 1979) або БДУ (Nakamura 1991; Suzuki a...
