коли нерухомій рідкої фазою є вода, ніякого додаткового зволоження паперу не роблять. При виборі в якості нерухомої фази деяких органічних речовин, гідрофільну папір перетворюють на гідрофобну, просочуючи її розчинами різних гідрофобних речовин (парафіну, рослинної олії та ін.) [2]
У вибраних розчинниках компоненти проби повинні мати різну розчинність, інакше поділу взагалі не відбудеться. У розчиннику, що є рухомою фазою, розчинність кожного компонента повинна бути меншою, ніж в розчиннику нерухомої фази, але все ж складати цілком помітне значення. Це обмеження пов'язане з тим, що якщо розчинність речовини буде дуже велика, речовина буде рухатися разом з фронтом розчинника, а якщо розчинність буде дуже мала, речовина залишиться на початковій лінії. [2]
Для поділу водорозчинних речовин в якості рухомої фази зазвичай беруть органічний розчинник, а в якості нерухомої - воду. Якщо речовина розчинно в органічних розчинниках, вода використовується вже в якості рухомої фази, а органічний розчинник є нерухомою фазою. Це так званий метод звернених фаз. [2]
До розчинників звичайно пред'являються такі вимоги:
В· розчинники рухомою і нерухомою фаз не повинні змішуватися
В· склад розчинника в процесі хроматографування не повинен змінюватися
В· розчинники повинні легко видалятися з паперу
В· бути недефіцитних і нешкідливими для людини. [2]
Індивідуальні розчинники в розподільній хроматографії використовують відносно рідко. Частіше для цієї мети вживають суміші речовин, наприклад бутилового або амилового спирту з метиловим або етиловим, насичені водні розчини фенолу, крезолу і ін, суміші бутилового спирту з оцтовою кислотою, аміаком і т. д. Застосування різних сумішей розчинників дозволяє плавно змінювати R f і тим самим створювати найбільш сприятливі умови поділу. [2]
У паперовій хроматографії речовини розрізняються за їх відносному положенню на папері після того, як розчинник пройде певну відстань. Невелике кількість розчину суміші (10-20мкл), яку потрібно розділити, наносять у зазначену точку на папері і висушують. Отримане пляма називають стартовим. Потім папір поміщають в герметичну камеру і один її кінець занурюють у розчинник, який є рухомою фазою. Під дією капілярних сил розчинник рухається по паперу, розчиняючи і захоплюючи за собою компоненти зразка. До початку руху зразок повинен повністю розчинитися, тому швидкість розчинення компонентів у рухомій фазі є одним з факторів, визначають ефективність розділення. Після того, як розчинник пройде певну відстань, лист виймають і сушать. Плями на хроматограмах можуть бути виявлені за кольором, флуоресценції, за допомогою хімічних реакцій, для чого папір обприскують або занурюють у різні реагенти, або ж по радіоактивності. Ідентифікацію проводять звичайно шляхом порівняння із зразками з відомими величинами Rf або після елюювання, яке зводиться до вирізання зони, яка містить пляма, і подальшого пр...
