. Так, наприклад, шведська фірма Pharmacia пропонує список з 18 типів сефадексе з індексами від G-10 до G-200, в Відповідно до поступово збільшуються розмірами пір. Японська фірма Toyopearl випускає 10 типів гранул для гель-фільтрації з індексами від HW40C до HW75F.
Мені залишається звернути увагу читача на те, що всі матриці для гель-фільтрації на основі декстрану, агарози і целюлози у своїх В«цукровихВ» ланках містять безліч ОН-груп, по яким можливі приєднання різних хімічно активних молекул, здійснюють бажану модифікацію початково нейтральних гранул. З цими модифікаціями ми познайомимося в наступних розділах, де мова піде про справжню хроматографії.
Детектори речовини
Їх призначення - вести безперервну реєстрацію складу рідини, яка витікає з колонки, на предмет виявлення в ній шуканих фракцій речовини. Оскільки одночасно з реєстрацією проводиться автоматично відлік пробірок в колекторі фракцій, експериментатор звільняється від тривалої перевірки вмісту кожної пробірки. Розподіл по них фракцій досліджуваної речовини з'ясовується вже в ході хроматографії.
Реєстрацію білків і нуклеїнових кислот виробляють з поглинання світла в ультрафіолетовій області спектра. Білки і пептиди поглинають в області 206-215 тц за рахунок пептидного зв'язку, а також у широкої області поблизу 280 тц за рахунок присутності в них ароматичних амінокислот. (Неароматичних амінокислоти при їх хроматографічному поділі доводиться спеціально фарбувати.) Нуклеїнові кислоти, так само як і самі нуклеїнові підстави, добре поглинають ультрафіолетове світло поблизу 260 тц.
У деяких випадках (згадаємо про секвенатор ДНК) реєструвати вихід речовини з хроматографічної колонки можна і по флюоресценції. Однак при цьому потрібна додаткова операція попереднього фарбування даного нас речовини флюоресцентним барвником.
У переважній більшості випадків реєстрацію виходять з хроматографічної колонки білків, нуклеїнових кислот або їх фрагментів ведуть з поглинання світла в ультрафіолетовій області, поблизу 280 і 260 тц відповідно.
Для цієї мети служать так звані УФ-денситометри.
Головним елементом цього приладу є джерело випромінювання - найчастіше ртутна лампа низького тиску. Більш 90% испускаемого нею світла припадає на частку яскравою спектральної смуги з довжиною хвилі 254 тц. Випромінювання з довжиною хвилі поблизу 280 тц можна отримати за допомогою тієї ж лампи, якщо її світлом опромінювати флюоресцирующий на цій довжині хвилі В«ВториннийВ» джерело світла. У нові моделі УФ-денситометрів встановлюють ще й безелектродних газорозрядну лампу, що дає сильну смугу випускання з довжиною хвилі 206 тц, що в десятки разів підвищує чутливість цих приладів по відношенню до білків.
Важливим елементом УФ-детектора є кварцова кювету, через яку безперервно протікає виходить з колонки рідина. Використовуються кювети як циліндричної форми, так і прямокутні, обсягом у кілька десятків м...
