тих тварин не пізніше ніж через 2 години після загибелі беруть невеликі шматочки слизової оболонки носа, гортані, трахеї, а також легень, головного мозку, уражених ділянок шлунково-кишкового тракту, органи абортивного плоду, які поміщають в стерильні флакони і доставляють в лабораторію в термосі з льодом.
Лабораторні дослідження передбачають виявлення в патологічному матеріалі вірусного антигену методом імунофлюоресценції, виділення збудника і його ідентифікацію в РН і РІФ, виявлення антитіл в крові перехворілих тварин (серологічна діагностика) в РНГА та РН.
Виявлення вірусного антигену ІФ методом. Зі слизової оболонки носової перегородки, бронхів, трахеї, піхви роблять скальпелем зскрібки, вносять їх до центрифужні пробірки з 5 мл фізіологічного розчину і центрифугують 10 хв при 2000 об./Хв. Осад клітин приготування суспензії в 0,5 мл того ж розчину і на знежирених предметних стеклах готують по 4 мазка з кожного досліджуваного препарату. Одночасно готують по 4 препарату-відбитка або гістосреза зі шматочків легень, головного мозку, органів абортовану плоду. Препарати підсушують на повітрі, фіксують 5 хв в ацетоні, забарвлюють флюоресцирующими сироватками у вологій камері при 37 В° С протягом 45 хв. Потім їх обполіскують в трьох змінах фізіологічного розчину (рН 7,2 - 7,4) і в дистильованої воді, підсушують на повітрі, досліджують під люмінесцентним мікроскопом. p align="justify"> У позитивних випадках у ядрі на тьмяному зеленувато-сірому тлі тканини виявляють яскраве зеленувато-жовте дифузне або у вигляді гранул світіння вірусного антигену.
Для контролю специфічності світіння ставлять реакцію придушення імунофлюоресценції. Для цього на два препарати з органу, при дослідженні якого отримана позитивна реакція імунофлюоресценції, наносять специфічну сироватку в розведенні 1:10 і витримують в термостаті у вологій камері 30 хв. p align="justify"> У контрольних препаратах, оброблених послідовно специфічної і флюоресцирующей сироватками, специфічне світіння відсутня.
Виділення вірусу в культурі клітин. Флакони зі змивами, а також зі слизом і зішкріб, ресуспензірованнимі в розчині Хенкса з антибіотиками, центрифугують 10 хв при 2 тис. об/хв, супернатант відсмоктують у стерильний посуд, куди вносять по 500 ОД/мл пеніциліну і 500 мкг/мл стрептоміцину , витримують 2-4 год при 4 В° С і використовують для зараження культур клітин.
З шматочків слизової оболонки носової порожнини, трахеї, бронхів, а також легенів і головного мозку готують 10%-ву суспензію на розчині Хенкса з антибіотиками, центрифугують 20 хв при 5 тис. об/хв. Супернатант відсмоктують, витримують 2-4 год при 4 В° С і використовують для зараження культур клітин. p align="justify"> віруссодержащего матеріалом заражають по 5 первинно-трипсінізірована культур клітин нирок або селезінки ембріона корови, нирок теляти, тестикулів бичків. Пробірки з монослоем клітин ві...
