дмивають розчином Хенкса, вносять по 0,1-0,2 мл кожного досліджуваного матеріалу, витримують 60-90 хв при 37 В° С в термостаті. Потім віруссодержащего матеріал видаляють, додають 1 мл підтримуючого середовища, що містить 200 ОД/мл пеніциліну і 200 мкг/мл стрептоміцину, ставлять на інкубацію при 37 В° С. Контролем служать 4 пробірки з незараженими культурами клітин, в яких ростові середу замінюють підтримуючої. Перегляд пробірок починають з 2-го дня і проводять 7 - ^ 14 діб - до виявлення ЦПД, яке проявляється зазвичай через 36-48 ч.
При цитологічному дослідженні інфікованої культури клітин, пофарбованої гематоксилін-еозином, виявляють внутрішньоядерні тільця-включення.
Ідентифікація вірусу в РН. Виділений вірус розводять від 10 ~ 'до 10 ~ 7, специфічну і негативну (контрольну) сироватки 1:10 живильним середовищем для культур клітин. Сироватки перед постановкою реакції інактивують 30 хв при 56 В° С у водяній бані. До кожного розведення вірусу в першому ряду додають рівний об'єм специфічної сироватки, у другому ряду - негативною. Суміші витримують 1 год при 37 В° С, потім вносять по 0,1 мл кожної в 4 пробирочную культури клітин, куди додають також по 0,9 мл підтримуючого середовища. Інкубують при 37 В° С до повного прояву ЦПД. Титр вірусу визначають у присутності специфічної і негативною сироваток і виражають його в log ТЦД50/мл. p align="justify"> Видову приналежність вірусу встановлюють за наявності різниці в титрах вірусу з негативною і позитивною сироватками не менше ніж на 2 логарифма.
Серологічна діагностика грунтується на постановці РН і РНГА. Для дослідження використовують парні сироватки крові, взяті в перші 2-3 діб хвороби, а потім через 14-30 дн. Перед дослідженням сироватки прогрівають 30 хв при 56 В° С.
Постановка та облік РН. Готують дворазові розведення досліджуваних сироваток від 1:2 до 1:64 на живильному середовищі для культур клітин в обсязі 0,5 мл. p align="justify"> Наявний в діагностичному наборі вірус попередньо титрують в культурі клітин. Для цього сухий антиген (вірус) розводять десятикратно від 10 ~ 'до 10 ~ 10 (кінцевий титр сухого антигену вказано на етикетці) живильним середовищем. Кожним розведенням з вірусу в обсязі 1 мл заражають по 4 пробірки з культурою клітин, відмитої розчином Хенкса. Культури клітин інкубують при 37 В° С, щодня переглядають протягом 5-7 діб. Титром вірусу вважають його найбільше розведення, що викликає ЦПД в 50% культур клітин. Обчислюють титр по Риду-Менчу і виражають у ТЦД so/мл. Потім готують необхідний обсяг вірусу, що містить 100 ТЦДзч в 0,1 мл, і додають рівний об'єм його (0,5 мл) у кожну пробірку з розведенням сироваток. Суміш вірусу і сироватки витримують 1 год при 37 В° С, вносять кожну в обсязі 0,2 мл в 4 пробірки з культурою клітин, куди додають 0,8 мл підтримуючого середовища. Інкубують в термостаті при 37 В°. Контролем служать 4 пробірки з незаражен...
