і тривалий час, тому використовують ферменти, виділені з термофілів - Thermus aquaticus (Taq-полімераза), Pirococcus furiosus (Pfu-полімераза), Pirococcus woesei (Pwo-полімераза) та інші.
Дезоксирибонуклеотидфосфаты (dATP, dGTP, dCTP, dTTP).
Іони Mg 2 + , необхідні для роботи полімерази.
Буферний розчин, що забезпечує необхідні умови реакції - pH, іонну силу розчину. Містить солі, бичачий сироватковий альбумін. p align="justify"> Для того, щоб пройшла реакція, необхідно двухцепочечную ДНК розділити на 2 комплементарних нитки. Це досягається шляхом нагрівання робочої суміші до 93-95 градусів. Далі необхідно приєднати праймери до комплементарним ділянкам. Для цього потрібно знизити температуру до такого рівня, при котрому праймер зможе прикріпитися до комплементарному ділянці. Така температура називається температурою відпалу, її можна розрахувати за формулою:
t = (A + T) x 2 + (G+ C) x4 - 5C
Після того, як праймер прикріпився до потрібної ділянки, ставиться оптимальна температура для роботи Taq-полімерази. Вона дорівнює 72 градусам. Наступним кроком буде повторна денатурація ДНК при 93-95 градусах. Припустимо, у нас була спочатку всього одна ДНК, якщо ми проведемо 35 вищеописаних циклів, ми отримаємо: 1х2 34 = 17179869184 копії. селекція пшениця генний молекулярний
Для того, щоб візуалізувати результати проведеної реакції, зазвичай використовують електрофорез. Що таке електрофорез? Поділ чого-небудь за допомогою електричного струму. Електрофорез проводять в гелі. Гель може бути агарозном, або акріламідним. Гель роблять не на основі дистильованої води, а на основі розчину електролітів (солей і кислот), як правило, це трис-HCL, борна кислота і ЕДТА. Електроліти служать провідниками електричного струму. Так як молекули ДНК заряджені негативно, вони починають рухатися в бік катода. Але, гель представляє для молекул досить потужну перешкоду, чим вони більші за своїм розміром, тим важче їм продиратися через шар молекул гелю. Таким чином, більш дрібні молекули (50 bp) за годину електрофорезу встигають пройти кілька сантиметрів, а більші (1000 bp), проходять від сили пару сантиметрів. Ми не можемо спостерігати ДНК, якщо нічим її не почервоніли. Щоб її було видно, використовують бромистий етидій або імпрегнують сріблом. Бромистий етидій крім того, що активно зв'язується з молекулами ДНК, ще й світиться в ультрафіолетовому світлі. p align="justify"> Сателітна ДНК
мікросателітів - (або прості короткі (тандемні) повтори) - варьирующие ділянки (локуси) в ядерній ДНК і ДНК органел (мітохондрій і пластид), що складаються з повторюваних фрагментів довжиною від 1 до 6 пар о...
