- двухцепочечную ДНК-матрицю нагрівають до 94-96 ° C (або до 98 ° C, якщо використовується особливо термостабильная полімераза) на 0,5-2 хв, щоб ланцюга ДНК розійшлися.
Відпал - в момент розбіжності ланцюгів, температуру знижують, щоб праймери могли зв'язатися з одноцепочечной матрицею.
Елонгація - ДНК-полімераза реплікує матричну ланцюг, використовуючи праймер в якості затравки [10, 11].
. 2.5 Білкові структури
Білки - це високомолекулярні сполуки, у яких сотні і навіть тисячі залишків? - амінокислот з'єднані один з одним кетоіміднимі (пептидними) зв'язками (-CO-NH-), утворюючи довгі ланцюги головних валентностей - поліпептидні ланцюга:
(1)
де R, R , R ... - Бічні групи або бічні ланцюги у окремих амінокислотних залишків. Пептидні зв'язки утворюються шляхом відщеплення води від карбоксильної групи однієї амінокислоти і аміногрупи інший. До складу білків входять залишки більше 20 різних амінокислот. Структура білків характеризується не тільки хімічним складом і порядком чергування різних амінокислотних залишків у поліпептидному ланцюзі, але так само і розташуванням цих ланцюгів в просторі, що обумовлює існування практично неозорогобезлічі білків з різноманітними властивостями. У білках розрізняють чотири порядки морфологічної організації або чотири структури. Перший порядок, або первинна структура, - поліпептидний ланцюг з певною послідовністю чергування амінокислотних залишків. Другий порядок - та просторова конфігурація, яку приймає сама поліпептидний ланцюг. Вторинною структурою може бути, наприклад? - Спіраль Полінга - Корі, що має 3,7 амінокислотних залишків в одному витку. Третій порядок - конфігурація, що виникає в результаті складання або закручування структур, відповідних другого порядку.
Малюнок 4 - Схеми первинної та вторинної білкової структури
Четвертий порядок - об'єднання декількох часток з третинної структурою в одну більш велику частку [12, 13].
. 3 Методи люмінесценцентного аналізу
Люмінесценція являє собою особливий вид випромінювання, надлишкове над тепловим і триваюче протягом часу, значно перевищує період світлових коливань. Взагалі кажучи, люмінесценцію слідують відрізняти від світлового розсіювання і від світлового віддзеркалення тим, що при ній в періоди між поглинанням і випусканням, відбуваються процеси проміжного характеру, тривалість яких перевищує період світлової хвилі. Люмінесценцію часто називають холодним свіченням.
Люмінесценцію слід класифікувати по тривалості, механізму перетворення і накопичення енергії, а так само за часовими характеристиками випромінювання. А саме:
Фотолюмінесценція - збудження світлом.
радіолюмінесценція - збудження радіаційним проникаючим випромінюванням.
Електролюмінесценція - збудження електричним полем.
тріболюмінесценціей - збудження при механічних впливах.
Хемілюмінесценція - збудження, що протікає у хімічних реакціях.
За тривалості свічення розрізняють як флуоресценцію (швидко загасаюча люмінесценція) і фосфоресценція (тривала люмінесценція). По механізму процесів розрізняють як спонтанну, резонансну, вимушену і рекомбінаційну люмінесценцію.
У даній роботі розглядається збудження, що протікає у хімічних реакціях, тобто хемілюмінесценція. Так як в даній роботі використовується метод хемілюмінесценції, то слід розглянути основні особливості флуоресценції і хемілюмінесценції, принцип роботи хемілюмінометре, а так само роботу фотоелектронного помножувача як один з основних елементів хемілюмінометре [14].
. 3.1 Флуоресценція
Флуоресценція - люмінесценція, загасаюча протягом короткого часу. Роздільна люмінесценції на флуоресценцію і фосфоресценцію застаріло, набуло умовний сенс якісної характеристики її тривалості. По механізму перетворення енергії збудження флуоресценція, як правило, є спонтанною люмінесценцією, тому її тривалість визначається часом життя на збудженому рівні енергії (у разі заборонених переходів флуоресценції в цьому сенсі може мати значну тривалість).
Флуоресценція спостерігається в атомних і молекулярних газах. Багато органічні речовини мають флуоресценцією в рідких і твердих розчинах, а також в кристалічному стані. Спектри флуоресценції, її поляризація і кінетика пов'язані зі структурою і симетрією центрів люмінесценції або молекул, характером їх взаємодії, залежать від концентрації розчинів, виду збудження і т.д. Тому за допомогою флуоресценція вивчають структуру речовини і фізичні процеси, що відбуваються в ...
