в плазміду нуклеотидної послідовністю, експресує гібридний білок, який складається з лінійного проінсуліна і приєднаного до його N-кінця через залишок метіоніну фрагмента білка А Staphylococcus aureus. p> Культивування насиченою біомаси клітин рекомбінантного штаму забезпечує початок виробництва гібридного білка, виділення і послідовна трансформація якого in tube призводять до інсуліну.
Можливий і інший шлях: виходить у бактеріальної системі експресії злитої рекомбінантний білок, що з проінсуліна людини і приєднаного до нього через залишок метіоніну полігістідінового "хвоста". Його виділяють, використовуючи хелатную хроматографію на колонках з Ni-агарози з тілець включення і розщеплювали бромцианом.
Виділений білок є S-сульфонованого. Картування і мас-спектрометричний аналіз отриманого проінсуліна, очищеного ионнообменной хроматографії на анионите та ОФ (обращеннофазовой) ВЕРХ (високоефективної рідинної хроматографією), показують наявність дисульфідних містків, відповідних дисульфідні містках нативного проінсуліна людини.
Останнім час пильну увагу приділяється спрощенню процедури отримання рекомбінантного інсуліну методами генної інженерії. Так, наприклад, можна отримати злитою білок, що з лідерного пептиду інтерлейкіну 2 приєднаного до N-кінця проінсуліна, через залишок лізину. Білок ефективно експресується і локалізується в тільцях включення. Після виділення білок розщеплюється трипсином з отриманням інсуліну і С-пептиду.
Отримані інсулін і С-пептид очищалися ОФ ВЕРХ. При створенні злитих конструкцій вельми істотним є співвідношення мас білка носія та цільового поліпептиду. З-пептиди з'єднуються за принципом "голова-хвіст" за допомогою амінокислотних спейсеров, несучих сайт рестрикції Sfi I і два залишку аргініну на початку і в кінці спейсера для подальшого розщеплювання білка трипсином. ВЕРХ продуктів розщеплення показує, що відщеплення С-пептиду проходить кількісно, ​​а це дозволяє використовувати спосіб мультімерной синтетичних генів для отримання цільових поліпептидів в промисловому масштабі.
В
Висновок
Цукровий діабет - хронічне захворювання, обумовлене абсолютною або відносною недостатністю інсуліну. Воно характеризується глибоким порушенням обміну вуглеводів з гіперглікемією і глюкозурією, а також іншими порушеннями обміну речовин в результаті впливу ряду генетичних і зовнішніх чинників.
Інсулін до теперішнього часу служить радикальним, а в більшості випадків єдиним засобом для підтримки життя і працездатності хворих на цукровий діабет. До отримання та впровадження інсуліну в клініку в 1922-1923 рр.. хворих на цукровий діабетом I типу чекав летальний результат протягом одного-двох років з початку захворювання, незважаючи на застосування найбільш виснажливих дієт. Хворі на цукровий діабетом I типу потребують довічної замісної терапії препаратами інсуліну. Припинення чинності тих чи інших причин регулярного введення інсуліну веде...
