льфокіслоти, рН = 3,5).
За відсутності чітких літературних аналогій починають поділ методом іон-парної хроматографії на зверненої фазі C18 з розміром частинок 5-10 мкм. Наповнювачем в іон-арної хроматографії з добавкою органічної нерухомої ази є матеріал, використовуваний для зверненої фази, при роботі з нормальною фазою застосовують звичайний силікагель 5-10 мкм, як і у випадку адсорбційної хроматографії. можливе застосування нейтральних полістирол-дівінільних смол або смол ХАД. Колонки з C18 служать довше в іон-парної хроматографії, ніж колонки з нерухомою фазою, що має більш коротку вуглеводневий ланцюг. Подальша після В«прив'язуванняВ» фази сіланізація покращує властивості матеріалу і збільшує термін його служби (партісіл 5 ОДС).
Для збільшення стабільності колонки рН слід зменшувати в міру збільшення концентрації протівоіона.
Для цієї ж мети запропоновано використовувати триетиламін в якості підстави, так як цей реактив доступний, розчинний, зручний в роботі і має малу хімічної актив-ністю. Передбачається, що сильні підстави, так само як четвертинні гідроксиди, руйнують сілікагелевой підкладку. Рухливу фазу для іон-парної хроматографії бажано фільтрувати через фільтр зі скловолокна, а після закінчення роботи колонку слід промивати п'ятикратним об'ємом елюенту метанол - вода (50: 50).
В
Рис. 1. Хроматограмма вітамінів, отримана на колонці розміром 300 Х 4 мм з Ој-бондапаком C 18 , рухома фаза - метанол - вода (70: 30) з 0,1% В7 і В5 (1:1), витрата 1 мл/хв, детектор-УФ (254 нм): 1 - нікотинамід; 2 - піродоксін; 3 - рибофлавін; 4 - тіамін
Рис. 2. Хроматограмма ізомерів фталевої кислоти, отримана на колонці розміром 300 Х 4 мм з Ој-бондапаком C 18 , рухома фаза - вода з добавкою реактиву А, метанол з добавкою реактиву А, градієнт від 5 до 40% метанолу за 15 хв, швидкість потоку 2 мл/хв, детектор - УФ (254 нм): 1 - терефталева кислота; 2 - ортофталевої кислота, 3 - ізофталевої кислота
Необхідно, щоб протиіон розчинявся в елюенті. Неправильний вибір протівоіона може призвести до утворення осаду, що викличе зростання значень k ', розмивання піку і помітне підвищення тиску на вході. Концентрація зазвичай коливається від 0,01 М для протівоіона з малою довжиною ланцюга до 0,005 М для протівоіона з більш довгим ланцюгом.
Для препаративних розділень іон-парну хроматографію не застосовують, а кількість введеного зразка порівнянно з кількостями, застосовуваними для розподільної хроматографії. Збільшення максимально вводиться кількості може бути досягнуто за рахунок попереднього утворення іонних пар у зразку. Для деяких іонізованих (Незалежно від рН) аніонів і катіонів не потрібно добавка буфера. Кислоти звичайно розділяються при рН = 4-7,4, а підстави - при рН = 2-5. При цьому значення рН рухомої фази можуть для поліпшення селективності розділення змінюватись.
Слід пам'ятати, що іон-парна хроматографія на зверненої фазі...
