бо трісіалогангліозідам.
Необхідною умовою кількісного визначення сфінгозінових підстав є попередній гідроліз сфинголипидов.
Кількісне визначення гомологів сфингозина, одержуваних після гідролізу сфинголипидов проводять колориметричним методом. Сфінгозин реагує з метілоренжем з утворенням забарвленого комплексу, інтенсивність забарвлення якого пропорційна концентрації сфингозина.
Хід визначення: осад сфінгозінових підстав розчиняють у в 1мл етанолу, до розчину додають 5мл етилацетату, 5 мл 0,01 М ацетатного буфера (pH=3,65), 0,1 мл метилоранжа. Суміш струшують, при цьому утворюється два шари: верхній, етілацетатний, що містить забарвлений комплекс сфингозина і метіолранжа, жовтого кольору, і нижній, водний, яскраво-червоний. Етілацетатний шар збирають і фотометрируют. Кількість сфингозина визначають за калібрувальної кривої, яку будують за стандартним розчину сфингозина, отриманого методом периодатного окислення з цереброзидів мозку.
мозок цереброзидів сульфатідов сфингозин
3.8 Препаративне одержання сфингозина методом периодатного окислення
При побудові калібрувальної кривої для кількісного визначення сфінгозінових підстав колориметричним методом необхідно мати стандартний препарат сфингозина. Для отримання сфингозина використовують кристалічні цереброзидів, виділені з ліпідного екстракту головного мозку за методом Азмена. З цереброзидів сфингозин виділяють методом периодатного окислення.
Так, цереброзидів мозку піддають перйодатного окисленню (HIO4), при якому відбувається розщеплення глюкозідной кільця з утворенням проміжного діальдегіду, який далі відновлюється боргідратом натрію (NaBH4) до полиола.
Потім за допомогою кислотного гідролізу (HCl) отримуємо церамід, а з нього шляхом лужного гідролізу (KOH) - сфінгозіsн.
Отриманий сфингозин піддають хроматографічному розділенню в тонкому шарі силікагелю в системі розчинників хлороформ - метанол - аміак (40: 10: 1), в цій системі поділяються стереоізомери сфингозина, сфінганін і 3-О-метиловий ефір сфингозина. Хроматограму проявляють розчином нингидрина в бутанолі.
