лактози, а для визначення глюкоцереброзідов відповідно по розчину глюкози.
Метод зручний тим, що не вимагає попереднього гідролізу
3.4 Кількісне визначення сульфатідов по сульфатної групі
Метод Кіна - швидкий і чутливий метод, що не вимагає попереднього відщеплення сульфатної угруповання. Основі методу лежить здатність сульфатідов утворювати забарвлені комплекси з деякими барвниками. Раніше застосовували метиленовим синь, пізніше перейшли на АЗУР та ін. Поглинання пофарбованої суміші ліпідів вимірюють на спектрофотометрі при довжині хвилі характерної для даного барвника.
3.5 Визначення кількості сульфатідов у складі загальної фракції цереброзидів по сульфатної групі
Кількісне визначення сульфатідов можливо і без їх попереднього виділення, прямо з сумарної цереброзідной фракції або навіть загальних ліпідів. Таке визначення засноване на попередньому гідролізі ліпідного екстракту. Гідроліз проводять в соляній кислоті (22,7%). Принцип методу полягає в тому, що вивільняється при гідролізі іон SO42- взаємодіє з BaCl2 c утворенням осаду BaSO4. На спектрофотометрі вимірюють поглинання в УФ області, калібрувальну криву будують по стандартному розчину K2SO4
3.6 Визначення питомої радіоактивності окремих фракцій цереброзидів і сульфатідов головного мозку
За допомогою методу радіоактивної індикації можна вивчати метаболізм пластичних і енергетичних речовин. Тварині в кров вводять мічені радіоактивні 14С-з'єднання. Реєстрацію ізотопів проводять сцинтиляційним методом, який заснований на перетворенні енергії первинних заряджених частинок в енергію електромагнітного випромінювання. Перетворення енергії здійснюється за допомогою сцинтилятора: рідкого для? - Частинок і кристалічного для? - Випромінювання. Поглинаючи енергію заряджених частинок, сцинтилятор випромінює фотони які реєструвалися за допомогою фотоелектронного помножувача (ФЕУ). Фотони потрапляють на фотокатод ФЕУ, де відбувається вибивання фотоелектронів, енергія яких перетворюється в електричні імпульси. Електричні імпульси характеризуються числом імпульсів, пропорційним радіоактивності, а також амплітудою, пропорційної енергії зарядженої частинки. Таким чином, число імпульсів пропорційно радіоактивності зразка, а їх амплітуда - енергії? - Частинок.
При дослідженні інтенсивності обміну фракцій цереброзидів і сульфатідов сцинтиляційним методом як радіоактивного попередника використовують 14С-ацетат при експозиції 1ч або 14С-глюкозу з радіоактивною експозицією 2ч. До осаду виділених фракцій додають сцинтиляційний розчин і вимірюють радіоактивність на сцинтиляційної установці. Питому Радіоактивність гликолипидов (імп/хв на 1мг) розраховують за формулою
УР=(А1-А2)/m,
де А1 - радіоактивність осаду цереброзидів або сульфатідов, А2 - радіоактивність фону, імп/хв; m - кількість гликолипидов в осаді, мг.
3.7 Визначення змісту і питомої радіоактивності сфінгозінових підстав цереброзидів і ганглиозидов мозку
Сфінгозіновие підстави є обов'язковими структурними компонентами церамідного частини молекули гликосфинголипидов: ганглиозидов, цереброзидів і сульфатідов. В даний час ідентифіковано різні сфінгозіновие підстави, що відрізняються один від одного числом вуглецевих атомів і гідроксильних груп, положення подвійного зв'язку, наявністю або відсутністю бічних розгалужень в ланцюзі. Церамідного частини молекули сфинголипидов відводиться структурно-каркасна роль у функціонуванні мембран. На користь цього свідчать дані про низьку метаболічної активності сфінгозінових основ у молекулі сфинголипидов, отримані методом радіоактивної індикації. Так, на частку сфінгозінових підстав і жирних кислот ганглиозидов мозку при введенні радіоактивного ацетату припадає лише незначна частина загальної радіоактивності всієї молекули незалежно від віку тварини, що служить показником стабільності цераміду сфинголипидов.
Принцип методу, реактиви і хід визначення питомої радіоактивності (УР) сфінгозінових підстав такі ж, як і для окремих фракцій цереброзидів і сульфатідов. Питому Радіоактивність (імп/хв на 1мг) розраховують за формулою
УР=(А1-А2)/m,
де А1 - радіоактивність осаду сфингозина, А2 - радіоактивність контролю, імп/хв; m - кількість сфингозина в осаді, мг.
Кількісне визначення сфінгозінових підстав також може бути рекомендовано для ідентифікації окремих типів ганглиозидов. Так, наприклад, ставлення N-ацетілнейраміновой кислота (мкмоль)/сфингозин (мкмоль) може бути використано при віднесенні індивідуальних ганглиозидов до моно-, ди- а...
