ікроскопа
Малюнок 7 ілюструє метод створення зображення: фото а, б, в - це зображення, отримані шляхом накладення базисних еталонних спектрів на експериментальні спектри зразка: мітохондрії (а), ендоплазматичнийретикулум (б) і ядерця (в ). Далі ці зображення були програмно об'єднані в одне за допомогою колірної кодування (г). Таким чином, отримане «кольорове» зображення різних елементів клітини не вимагає попереднього фарбування зразка.
Малюнок 7 - Побудова зображення клітини: накладення базисних спектрів на виміряні зображення зразка: а - мітохондрії, б - ендоплазматичний рітікулум, в - ядерця; г - зображення різних елементів клітини в колірній кодуванні.
Використання звичайної конфокальної мікроскопії для аналізу великих об'ємних об'єктів може виявитися непростим завданням, оскільки зображення в такому мікроскопі можна одержати тільки для елементів зразка, які перебувають у фокусі (наприклад, нерівні поверхні лікарських пре-Параті, виготовлених в вигляді цілої таблетки). У подібних випадках для аналізу можна скористатися технологією поверхневої мікроскопії.
Ця технологія дозволяє отримувати конфокальні раманівського спектри, регулюючи фокусна відстань відповідно до профілю поверхні, що дозволяє вимірювати профіль досліджуваної поверхні з великою точністю, в результаті чого навіть нерівна і похила поверхня завжди залишається у фокусі. Для реалізації цієї функції мікроскоп додатково обладнаний прецизійним датчиком для оптичної профілометри. Геометричні координати поверхні, отримані за допомогою вимірювання профілю, використовуються для регулювання фокусної відстані конфокального раманівського мікроскопа. У результаті виходить зображення хімічної структури, накладене на зображення топології поверхні зразка, включаючи його шорсткі і похилі елементи. Для реалізації даної функції використовується спеціальний конфокальний хроматичний датчик (рисунок 8).
Рисунок 8 - Принцип роботи конфокального хроматичного датчика
Світло з точкового джерела білого кольору фокусується на зразку за допомогою гіперхроматіческого об'єктива. Цей об'єктив має хороші фокусують характе-ристики і велику лінійну хроматичну похибку. Тому кожному кольору відповідає своє фокусна відстань. Відбитий від зразка світло збирається тим же об'єктивом і фокусується через мікроотвір на спектрометр. Оскільки на поверхні зразка може сфокусуватися тільки світловий одного кольору, тільки цей світло може пройти через Конфокальні мікроотвір. Довжина прийнятої світлової хвилі залежить від відстані до поверхні зразка.
В результаті сканування зразка в площині XY (розміри досліджуваної площі зразка не повинні перевищувати 50? 100 мм) будується профіль зразка. Профіль цього закладається в пам'ять ПО, надалі його використовують для регулювання фокусної відстані раманівського мікроскопа, щоб промінь лазера завжди був сфокусований на поверхні зразка (або на необхідній відстані під поверхнею). Залежно від типу датчика можна отримати горизонтальний дозвіл 10-25 мкм і вертикальне дозвіл 40-120 нм у вимірювальному діапазоні 1-3 мм при робочому відстані 10-16 мм (мікроскоп комплектується датчиками для інших діапазонів і з іншим дозволом за запитом дослідника ).
а б
Рисунок 8 - Зображення таблетки аспірину, отри...
