вирощування маточної культури в рідкому середовищі
Основою препарату є живі клітини бактерій Pseudomonas fluorescens AP 33. Її отримують з НПП «агроген» (м.Мінськ, Білорусь). Для отримання маточної культури (інокулюму) використовують рідку живильне середовище.
Культура представляється в пробірках на агарізірованной середовищі. Культура може зберігатися протягом 2 місяців при температурі + 4 ° C.
Для отримання маточної культури (інокулюму) використовують рідку живильне середовище.
Склад середовища:
· кукурудзяний екстракт - 1%
· меляса бурякова - 2%
· амоній сірчанокислий - 0,1%
· калій фосфорнокислий двозаміщений - 0,05%
· магній сірчанокислий - 0,02%
· вода водопровідна - до 100%
· pH середовища - 7,6
Всі компоненти середовища перемішують, доводять pH середовища до 7,6 (20 N p-cм NaOH). Готове середовище розливають у колби або 3-ч літрові банки, об'єм середовища не більше Ѕ об'єму колби або банки і стерилізують в автоклаві прі1 кгс/кв. см протягом 1:00.
Посівний матеріал в пробірках (на одвірках) змивають рідким живильним середовищем з використанням стерильної піпетки. Для інокуляції 0,5 л. середовища досить змити бактеріальні клітини з одного «косяка». Інокуляцію проводять у стерильних умовах.
інокулював середу в колбах вирощують протягом 24 годин на гойдалці (200 об/хв) при 28-30 градусів ° C. Вирощену маткову культуру піддають контролю. Виросли колонії аналізують при бактеріальної лампі. При виявленні нефлуоресцірующіх колоній маткову культуру анулюють.
Розглянемо етапи процесу приготування біологічного препарату найбільш докладно (рис. 1.2). Для отримання препарату використовують рідке середовище (склад приготування середовища описана вище).
Рідку середу в скляних 3-х літрових бутлях або в ферментерах (об'єм середовища не більше Ѕ об'єму бутлі або ферментера) інокуліруют матковий культурою з розрахунку 1/100 від обсягу середовища. Культивування проводять на гойдалках (200 об/хв) протягом 18 годин, в ферментерах протягом 16 годин при 28-30 градусах ° C.
Рис. 1.2 Процес приготування біологічного препарату
Точкову пробу відбирають в мірний циліндр з кожної одиниці фасування градуйованою піпеткою місткістю 10 куб. см, занурюючи її вертикально на всю глибину ємності. Препарат попередньо інтенсивно збовтують. Маса об'єднаної проби 100 куб. см. Відбір проб і роботу з визначення якості проводять у боксі.
Обсяг вибірки в залежності від розміру партії повинен складати: від партії 40 од. фасування - 15%, від 40 до 70 од.- 10%, понад 70 од.- 5%.
Об'єднану пробу ретельно перемішують, ділять навпіл і поміщають у дві стерильні колби.
Одну колбу передають в лабораторію для аналізу якості препарату, а іншу зберігають на випадок повторного аналізу протягом гарантованого терміну зберігання препарату.
Зовнішній вигляд і колір препарату визначають по кожній одиниці фасовки в момент відбору проби органолептически. Для цього пробу в кількості 5-10 куб. см поміщають у пробірку і розглядають при природному світлі, так само 5 куб. см препарату розбавляють в 40 куб. см дистильованої води, суспензію розмішують на магнітній мішалці і проводять вимірювання pH по інструкції до приладу.
Препарат фасують у стерильні 3-х літрові пляшки. Упаковується в споживчу тару: в картонні або дощаті ящики по 5-10 штук в кожній. Ящики повинні бути упаковані і обклеєні клейовою стрічкою з липким шаром по ГОСТ 20477, або поліпропіленовою стрічкою.
Переваги біологічного методу захисту рослин: можливість застосування проти конкретного агента в конкретний період його життя, відсутність залишків токсичних речовин і шкідливого впливу на біологічну повноцінність і безпеку захищаються рослин, і їх урожай, безпека для людей, зайнятих на роботах з біопрепаратами, і екологічно безпечно для навколишнього середовища.
Термін зберігання біологічного препарату при температурі +4 ° C без порушення стерильності з дати виготовлення не більше 1 місяця.
Виробнича структура філії ФГБУ «Россельхозцентр» по РТ включає в себе: мікробіологічну лабораторію, виробнича дільниця, морозильні камери, ділянка поживних середовищ, ділянка культивування, мийну, ділянка упаковки в готову продукцію, склад готової продукції.
Філія ФГБУ «Россельхозцентр» по РТ є відокремленим структурним підрозділом ФГБУ «Россельхозцентр».
