Зміст
Введення
1. Особливості отримання інтерферонів
2. Механізми дії інтерферонів
3. Терапевтичне застосування ІНФ людини
Висновок
Список літератури
Введення
Інтерферони являють собою білкові молекули з молекулярною масою від 15000 до 21000 дальтон, віднайдені і секретуються клітинами у відповідь на вірусну інфекцію або інші збудники. p> Інтерферони (ІФН) - група аутогенних глікопротеїнів, биомеханизм дії яких пов'язаний з одночасним противірусним ефектом - активацією клітинних генів, в внаслідок чого синтезуються білки, інгібуючі синтез вірусної ДНК (РНК) і володіють імуномодулюючою ефектом - здатністю посилювати експресію антигенів на клітинних мембранах і збільшувати активність цитотоксичних Т-клітин і природних кілерів [4]. p> ІФН поділяються на два типи. До першого типу, діє як інгібітори реплікації вірусу і інжинірингу противірусний ефект, відносяться 22 різних підтипу ІФН-О± і один підтип ІФН-ОІ. До другого типу, який виявляє імумономодуляторної активність, відносяться ІФН-Оі.
Існує три імунологічно різних класу ІФН: ІФН-О±, ІФН-ОІ, ІФН-Оі. p> До ІФН природного походження відносяться лімфобластоідний і лейкоцитарний ІФН (ІФН-О±), синтезовані відповідно стимульований моноцитами і В-лімфоцитами людини, які потім екстрагуються і очищаються; фібробластний ІФН (ІФН-ОІ), одержуваний з культури фібробластів людини, і Т-лімфоцитарний ІФН (ІФН-Оі). p> До штучно синтезованим ІФН відноситься рекомбінантний ІФН-О±, який являє собою високоочищений єдиний підтип ІФН-О±, одержуваний по рекомбінантної молекулярної технології [1].
1. Особливості отримання інтерферонів
Відомі способи отримання лейкоцитарного інтерферону людини з лейкоцитів донорської крові людини, індукованих вірусами та іншими індукторами. p> Основним недоліком цих способів отримання інтерферонів є ймовірність контамінації кінцевого продукту вірусами людини, такими як вірус гепатитів В і С, вірусу імунодефіциту та ін
В даний час більш перспективним визнаний спосіб отримання інтерферону мікробіологічними синтезом, який забезпечує можливість отримання цільового продукту із значно вищим виходом з порівняно недорогого вихідної сировини. Використовувані при цьому підходи дозволяють створити оптимальні для бактеріальної експресії варіанти структурного гена, а також регуляторних елементів, контролюючих його експресію.
В якості вихідних мікроорганізмів використовують різні конструкції штамів Pichia pastoris, Pseudomonas putida і Escherichia coli.
Недоліком використання P. pastoris в якості продуцента інтерферону, є вкрай складні умови ферментації цього типу дріжджів, необхідність суворо підтримувати концентрацію індуктора, зокрема метанолу, в процесі біосинтезу.
Недоліком використання штамів Ps. putida є складність процесу ферментації при низькому рівні експресії (10 мг інтерферону на 1 л культуральної середовища). Більш продуктивним є використання штамів Escherichia coli. p> Відомо велика кількість плазмід і створених на їх основі штамів Є. coli, експрессірующіх інтерферон: штами Е. coli ATCC 31633 і 31644 з плазмідами Z-pBR322 (Psti) HclF-11-206 або Z-pBR 322 (Pstl)/HclN SN 35-AHL6 (SU 1764515), штам Е. coli pINF-AP2 (SU 1312961), штам Е. coli pINF-F-Pa (AU 1312962), штам E.Coli SG 20050 з плазмидой p280/21FN (Кравченко В.В. та ін Біоорганічна хімія, 1987, т.13, № 9, с.1186-1193), штам E.Coli SG 20050 з плазмидой pINF14 (SU 1703691), штам E.coli SG 20050 з плазмидой pINF16 (RU 2054041) та ін Недоліком технологій, заснованих на використанні цих штамів, є їх нестабільність, а також недостатній рівень експресії інтерферону. p> Поряд з особливостями використовуваних штамів ефективність процесу багато в чому залежить від використовуваної технології виділення та очищення інтерферону.
Відомий спосіб отримання інтерферону, що включає в себе культивування клітин Ps. putida, руйнування біомаси, обробку поліетиленіміну, фракціонування сірчанокислим амонієм, гідрофобну хроматографію на фенілсілохроме С-80, рН-фракціонування лізата, його концентрування і діафільтрацію, іонообмінну хроматографію на целюлозі DE-52, елюювання в градієнті рН, іонообмінну хроматографію отриманого елюенту на целюлозі СМ-52, концентрування пропусканням через касету фільтрів і гель-фільтрацію на сефадексе G-100 (SU 1640996). Недоліком цього способу крім складної багатостадійної ферментації є многостадийность при отриманні кінцевого продукту.
Відомий також спосіб отримання інтерферону, що включає в себе культивування штаму E.coli SG 20050/pIF16, в LB-бульйоні в колбах в термостатовому шейкері, центрифугування біомаси, її промивку буферним розчином і обробку ультразвуком для руйнування клітин. Отриманий лизат центрифугують, промивають 3М розчином сечовини в буфері, розчиняють в розчині гуанідин хлориду в буфері, обробляють ультразвуком, центрифу...
