Федеральне агентство з освіти
Державна освітня установа вищої професійної навчання
Реферат на тему:
Постановка реакції ПЛР
Челябінськ 2008
ЗМІСТ
Введення
1. Пристрій, завдання та функції лабораторії імунологічного типування тканин
2. Виділення ДНК із венозної крові
3. Проведення ПЛР
4. Хід реакції
5. Аналіз ПЦР-ампліфікованої ДНК
Висновок
ВСТУП
У початку 1970-х років норвезькому вченому К'еллу Клеппе (Kjell Kleppe) з лабораторії нобелівського лауреата Хара Гобіндом хору (Har Gobind Khorana) прийшла в голову думка, що можна ампліфікувати ДНК за допомогою пари коротких одноланцюгових молекул ДНК - синтетичних праймерів. Однак у той час ця ідея залишилася незатребуваною. Полімеразна ланцюгова реакція була знову відкрита в 1983 році Кері Малліс (Kary Mullis). Його метою було створення методу, який би дозволив ампліфікувати ДНК в ході багаторазових послідовних подвоєнь вихідної молекули ДНК за допомогою ферменту ДНК-полімерази. Через 7 років після опублікування цієї ідеї, в 1993 р., Малліс отримав за неї Нобелівську премію.
ПЛР використовується в багатьох областях для проведення аналізів і в наукових експериментах. ПЛР дає можливість істотно прискорити і полегшити діагностику спадкових і вірусних захворювань, використовується для підбору гістосумісності донора органів і тканин, реєстрації всіх потенційних реципієнтів, які потребують тканинних і органних трансплантанта, проведення імунологічного контролю за приживленням пересаджених органів і тканин.
1. Пристрій, завдання та функції лабораторії імунологічного типування тканин
1. Загальні положення. p> 1.1. Лабораторія імунологічного типування (ІТ) організовується у складі станції переливання крові. p> 1.2. Лабораторія ІТ здійснює методичне керівництво імунологічним типуванням тканин в лікувальних установах підконтрольних адміністративної території. p> 1.3. Лабораторія ІТ здійснює зв'язок з лікувально-профілактичними установами зони з метою підбору гістосумісності донора органів і тканин, реєстрації всіх потенційних реципієнтів, які потребують тканинних і органних трансплантатів, проведення імунологічного контролю за приживленням пересаджених органів і тканин. p> 2. Основні завдання лабораторії імунологічного типування: організаційно-методичне керівництво за проведенням тканинного типування в лікувально-профілактичних установах адміністративної зони; організація збору, дослідження сироваток на наявність анти-HLA антитіл; дослідження антигенного складу тканин хворих з різними захворюваннями, донорів тканинних і органних трансплантатів.
3. Функції лабораторії імунологічного типування:
3.1. Лабораторія забезпечує усіма видами імунологічного дослідження хворих, що у лікувально-профілактичних установах курує регіону. p> 3.2. Лабораторія досліджує антигенний склад тканин потенційних донорів тканинних і органних трансплантатів та реципієнтів, становить картотеки тіпірованних донорів і реципієнтів, здійснює пошук сумісних пар донор-реципієнт. p> 3.3. Проводить прямі і зворотні проби на сумісність між сироваткою і форменими елементами крові донора і реципієнта. p> 3.4. Проводить спостереження імунологічними методами за розвитком посттрансфузійних реакцій і приживленням тканинних і органних трансплантатів. p> 3.5. Бере участь у складанні планів з підвищення кваліфікації співробітників лікувально-профілактичних установ зони по імунологічному типування тканин. p> 3.6. Організовує роз'яснювальну роботу в лікувально-профілактичних установах зони з питань клінічного значення імунологічних досліджень. p> 2. Виділення ДНК із венозної крові
Перед виділенням ДНК необхідно приготувати робочий розчин сольового буфера. Для цього Вміст флакона з 10-кратним сольових буфером, 10 мл, перенести в мірний циліндр, довести бидистиллированной водою до мітки 100 мл і 96% етиловим спиртом довести до мітки 300 мл і перемішати. Готовий робочий розчин сольових буфера слід зберігати в герметично закритому посуді при температурі 4 Лљ С. Сольовий буфер необхідний для подальшої промивки осаду з ДНК. p> Виділення ДНК проводять у спеціалізованому боксі для виділення. Необхідно дотримуватися правила техніки безпеки:
- руки повинні бути захищені одноразовими рукавичками, які утилізуються після виділення;
- дихальні шляхи захищені одноразової маскою, яка також підлягає утилізації після використання;
- лаборант під час виділення повинен бути одягнений у спеціальний халат, шапочку і окуляри.
Всі маніпуляції з досліджуваним матеріалом проводять при дотриманні правил роботи з вірусами III і IV групи. Постановку ПЛР здійснюють як мінімум в 3 робочих зонах:
Зона 1 (Ламінарний бокс, бок...
