Методики аналізу вітамінів
В
Вітамін А
В
(мол. вага 299,22)
Будучи сильно ненасиченим з'єднанням, вітамін А легко реагує з киснем повітря і окислюючими агентами.
Наявність у молекулі спиртової групи обумовлює реакції з хлорангидридами кислот з утворенням похідних - бензоат, ацетат та ін в-нафтойнокіслий ефір представляє кристалічна речовина, також володіє вітамінним дією.
Якісні реакції
1. Максимум абсорбції при 328 нм.
2. У хлороформний розчині з трихлористе сурмою з'являється синє забарвлення.
Кількісне визначення
Реакція з трихлористе сурмою використовується і для кількісного визначення. Синє забарвлення порівнюють зі стандартною шкалою так званих синіх одиниць.
5-10 г драже екстрагують хлороформом для вилучення вітаміну А, хлороформ відганяють. Залишок обмилюють 0,5 н. розчином спиртового розчину їдкого калі в продовження ВЅ години. Після цього із суміші витягують неомиляемие фракцію сірчаним ефіром 3-4 порціями (По 50-100 мл), з'єднані ефірні витяжки промивають водою, висушують безводним сульфатом натрію, розчинник без остачі видаляють випарюванням в струмі вуглекислоти, залишок розчиняють у хлороформі, щоб в 1 мл розчину містилося від 10 до 40 ИЕ вітаміну А.
До 0,2 мл хлороформного розчину додають 1 краплю оцтового ангідриду і 2 мл хлороформного розчину трихлористе сурми. Що з'являється синє забарвлення негайно порівнюють з відповідною по кольоровості пробіркою стандартної шкали або в ступінчастому фотометрі, фотоколориметрі і т. д.
При візуальному способі визначення найбільш точні результати виходять, якщо забарвлення за інтенсивністю укладається в межах 4-10-й пробірок.
Для приготування шкали пробірок-еталонів 75 г хімічно чистого сульфату міді і 3,5 г хімічно чистого нітрату кобальту розчиняють в 500 мл води. Отриманий розчин розбавляють водою, як зазначено нижче.
Реакція вітаміну А з трихлористе сурмою протікає швидко, досягаючи максимуму приблизно через 10 секунд; при низьких температурах (0-1 В°) забарвлення більш стійка; яскравий (денний або штучний) світло помітно впливає на швидкість вицветаемості.
Вітамін В1 (Тіамін-бромід бромістоводородной)
В
(мол. вага 435,2)
1. Якісні реакції. При додаванні до підкислення розведеною азотною кислотою 1%-ному розчину декількох крапель розчину нітрату срібла випадає сирнистий осад, не розчинний в азотній кислоті.
2. Тіохромная проба заснована на переведенні тіаміну червоною кров'яною сіллю у лужному середовищі в тіохром, розчинна в бутиловом або ізоамілового спирті з синьою флуоресценцією:
До 5 мл розчину тіаміну (з вмістом 0,01 мг) в ділильній воронці додають 5 мл 1%-ного розчину червоної кров'яної солі, перемішують і залишають стояти протягом 2 хвилин. Потім додають 20 мл ізобутилового спирту і сильно перемішують, струшуючи протягом 1 хвилини, від...
