ГОУ ВПО
(Кемеровський ДЕРЖАВНИЙ УНІВЕРСИТЕТ)
Біологічний факультет
Кафедра генетики
В В В В В В
Реферат для великого практикуму з молекулярної
генетиці і імунохімії
Тема: Імунологічні методи, засновані
на взаємодії антиген - антитіло
В В В
Викладач
д.м.н. А.В. Шабалдін
Роботу виконала
ст. 5 курсу
біологічного факультету
Луніна А.А.
В В В
КЕМЕРОВО 2007
В
Зміст
Введення
1. Подвійна радіальна іммунодіффузія по Ухтерлоні
Принцип
Проведення іммунодіффузіі
Оцінка результатів
Визначення титру
Область застосування
2. Проста лінійна іммунодіффузія по Уден
Принцип
Проведення іммунодіффузіі
3. Проста радіальна іммунодіффузія по Манчіні
Принцип
Проведення дослідження
Оцінка методу
4. Нефелометрія
Принцип методу
Проведення дослідження
Оцінка методу
5. Іммунодот і іммуноспот
6. Список літератури
В
Введення
В сучасний час широко використовують методи, засновані на взаємодії антиген - антитіло. До даних методів належать методи іммунодіффузіі, нефелометрії, іммунодот і іммуноспот. Вони широко використовуються для визначення числа антигенів у різних рідинах (сироватці крові, цереброспінальної рідини), для оцінки чистоти препаратів при виділенні антигенів, для порівняння відомих антигенів і антитіл з невідомими. Твердофазний імуноферментний аналіз є найбільш популярним методом у діагностиці різних вірусних, бактеріальних, грибкових і паразитарних хвороб людини і тварин.
В
1. Подвійна радіальна іммунодіффузія по Ухтерлоні
В
1.1. Принцип
У шарі агарового гелю рівномірної товщини на певній відстані один від одного вирізують лунки для антигену і антисироватки і заповнюють їх відповідними розчинами. Після цього антигени і антитіла дифундують в гель, зустрічаються один з одним і утворюють імунні комплекси, які преципітують в полях гелю і стають видимими як лінії преципітації.
В
1.2. Проведення іммунодіффузіі
Розплавляють агар (1,5 г) на водяній бані в 100 мл одного з пропонованих розчинників (0,15 М розчин Na Cl, веронал-ацетатний буфер з pH 8,6 і іонною силою 0,1). Гарячий агарозном гель розливають по 3 мл на предметні скла, розташовані строго горизонтально.
Щоб підсилити зчеплення гелю з поверхнею скла, предметні скла рекомендується покрити агарової плівкою. Для цього на скло наносять 1%-ний водний агарових золь і висушують при 70 В° С.
Залежно від завдання иммунохимического аналізу для вирізання лунок в гелю застосовують або спеціальні штампи різного профілю, або ін'єкційні голки, металеві або скляні трубочки з різними краями. Лунки для антигенів і антисироватки розташовують на відстані не менше 4 і не більше 10 мм.
Заповнивши лунки відповідними розчинами, платівки поміщають у вологу камеру. Іммунодіффузія можна проводити при 4, 20 і 37 В° С. Вона триває не менше 24г і може тривати до 6-7 днів. Утворення нових ліній преципітації слід спостерігати щодня. Тривалість іммунодіффузіі залежить від конкретної завдання дослідження і від ряду інших факторів. Результати іммунодіффузіі враховують безпосередньо на вологому препараті або спочатку видаляють непреціпітіровавшіе білки. Для цього препарати 2-3 рази занурюють на 12 год у ванночку з 0,15 М розчином NaCl, потім поверхню гелю накривають фільтрувальним папером, змоченою в дистильованої воді, і висушують при кімнатній температурі. Висушені препарати забарвлюють, наприклад аміди-чорним 10В, і враховують результати іммунодіффузіі.
В
1.3. Оцінка результатів
Число ліній преципітації
У різних антигенів часто бувають подібні коефіцієнти дифузії. Тому в багатокомпонентних системах антиген-антитіло в одному і тому ж ділянці гелю можуть з'явитися преципітати різної специфічності, що утворюють одну лінію преципітації. В інших випадках концентрації антигенів і антитіл і їх співвідношення можуть виявитися настільки несприятливими, що помітною преципітації просто не відбудеться. Тому число видимих ​​ліній преципітації звичайно менше числа систем антиген-антитіло і лише в кращому випадку дорівнює йому.
Розміщення преципітатів між лунками
При оптимальному співвідношенні між ан...
