Реферат
Гістологічні методи дослідження
гістологічний зріз електронна мікроскопія клітина
Гистохимические методи
Методи ідентифікації хімічних речовин в гістологічних зрізах. Складовою частиною Г. м. І. є цитохімічні методи, що виявляють хімічні речовини в клітинах приготованих мазків і відбитків. В основі гистохимического дослідження лежить з'єднання принципів і методів хімічного аналізу з принципами та методами морфологічного вивчення клітин і тканин, використовуваними в цитології та гістології. Завдяки цьому забезпечуються суттєві переваги у вивченні морфофункціональної організації рослинних і тваринних тканин, тому виявлене хімічна речовина можна пов'язати з певною тканинної або клітинною структурою, тобто встановити його локалізацію. Гістохімічні методи знаходять широке застосування в гістології, цитології, ембріології, патологічної анатомії, експериментальної і клінічної морфології. За допомогою різноманітних методів сучасної гистохимии можна судити про особливості функціонування різних тканинних і клітинних структур, визначати характер і темп обмінних процесів в клітинах і тканинах, виявляти ранні прояви захворювань.
Неодмінною умовою проведення гистохимического дослідження, особливо при виявленні ферментів та інших речовин білкової природи, є збереження структури тканин і клітин в стані, близькому до того, яке мається на живому організмі. Це досягається отриманням зрізів свіжозаморожених тканин за допомогою ножа глибокого охолодження і кріостата, а також використанням ліофільної сушки. Деякі гістохімічні дослідження., Наприклад виявлення вуглеводних сполук, можна проводити після спеціальної фіксації тканин і заливки в парафін.
Багато гістохімічні дослідження є груповими, тобто служать для виявлення сполук з однаковими або близькими властивостями. Інші Г. м. І. строго специфічні і застосовуються для виявлення певних речовин. Для виявлення вуглеводних сполук широко використовуються методи, засновані на метахромазії - властивості клітин і тканин забарвлюватися в колір, відрізняється від кольору барвника. Метахромазія обумовлена ??полімеризацією молекул барвника під впливом вільних негативних зарядів глікозаміногліканів (кислих борошно-полісахаридів), присутніх в тканини.
До високоспецифічний відносяться гістохімічні методи виявлення ферментів. В їх основу покладено вплив ферменту на специфічний субстрат в присутності іншої речовини, званого захоплюючим агентом (акцептором). З'єднуючись з первинним продуктом ферментативної реакції, акцептор утворює нерозчинний, зазвичай забарвлений, осад - кінцевий продукт реакції, який маркує місце дії ферменту. В якості акцепторів застосовують іони металів, солі діазонію та інші сполуки. Іони металів володіють високою електронною щільністю, тому можуть бути виявлені при електронно-мікроскопічному дослідженні. Ця властивість використовується в електронній гистохимии. Для визначення в тканинному зрізі дегідрогеназ застосовують солі тетразолію, які в присутності специфічного субстрату відновлюються з перетворенням в нерозчинні забарвлені продукти - формазану. Оцінка результатів гістохімічних реакцій, заснована на виборчій фарбуванні структур або випаданні забарвленого продукту реакції, може бути не тільки якісною, але і кількісної при використанні цито-спектрофотометрії. Можлива також візуальна напівкількісна оцінка інтенсивності фарбування в балах.
Електронна мікроскопія
Електронна мікроскопія - сукупність методів дослідження за допомогою електронних мікроскопів мікроструктур тіл, їх локального складу і локалізованих на поверхнях або в мікрооб'ємах тел електричних і магнітних полів.
На першому етапі електронна мікроскопія застосовувалася в основному для спостереження біологічних об'єктів, причому для інтерпретації знімків використовувався лише адсорбційний контраст. Однак поява методу реплік - відбитків, зроблених з поверхні, і особливо декорування їх металами (1940-ті - 1950-ті р.р.) позво-лило успішно вивчати неорганічні матеріали - відколи й злами кристалів. Приблизно з початку 1950-х років починаються інтенсивні спроби дослідження тонкої фольги матеріалів на просвіт. Це стало можливим в результаті істотного підвищення, до 100кВ, прискорює напруги в електронних мікроскопах. З цього періоду починається бурхливий розвиток електронно-мікроскопічної техніки, електронна мікроскопія знаходить все більш широке застосування у фізичному матеріалознавстві. Однією з найважливіших причин цього, мабуть, є можливість спостерігати в одному експерименті, як зображення об'єкта в реальному просторі, так і його дифракційну картину. То...
