тя біоматеріалу.
Контроль якості здійснювався регулярно, за допомогою участі в Федеральній програмі ФСВОК, внутрішньолабораторного контролю якості, використання контрольного матеріалу, проведення процедур внутрішнього контролю якості, забезпечених програмами лабораторного обладнання.
У план обстеження були включені: визначення активності КК, КК-МВ, АСТ, АЛТ, визначення АЧТЧ, фібриногену, ПТІ.
2.2 Біохімічні методи дослідження
2.2.1 Визначення активності креатинкінази і її ізоферменту МВ
Для отримання експериментальних даних використовувався УФ-кінетичний метод кількісного визначення КК [Tietz 1995, Young, 2001].
Принцип методу: КК каталізує оборотний перенесення фосфатної групи від фосфокреатина до АДФ (1). Ця реакція асоційована з подальшою: АТФ і глюкоза перетворюються на АДФ і глюкозо - 6-фосфат (2) під дією гексокінази і глюкозо - 6-фосфат дегідрогенази окисляє глюкозо - 6-фосфат і відновлює НАД (3):
Швидкість утворення NADРH, вимірювана фотометрически при 340нм, прямо пропорційна каталітичної активності (концентрації) КК, присутньої в пробі. Референтні значення КК наведені в таблиці 2.
Досліджуваний матеріал: Сироватка і гепаринизированной або ЕДТА-плазма.
Таблиця 2 - Референтні значення активності КК
Температура ісследованія25 ° С30 ° С37 ° СМужчіни, до80 Од/л130 Од/л195 Од/лЖенщіни, до70 Од/л110 Од/л170 Од/л
Метод: Кінетика по фактору (8095), час затримки 120 сек, час реакції 180 сек. Довжина хвилі 340 нм, оптичний шлях один см, проти бланка по дистильованій воді або по повітрю, температура 25, 30 або 37 градусів
[Інструкція до біохімічним наборам SPINREACT, 2010].
Для визначення активності КК-МВ використовувався оптимізований
УФ тест відповідно до рекомендацій DGKC (Німецьке Товариство Клінічної Хімії) і IFCC (Міжнародна Федерація Клінічної хімії та лабораторної медицини) для КК з інгібуванням ізоферменту КФК-М моноклональними антитілами [Lee, Goldman, 1996].
Принцип методу: КК-МВ складається з субодиниць КК-М і КК-В. Специфічні антитіла проти КК-М повністю пригнічують активність КК-ММ (основна частина загальної активності КК) і КФК-М (субодиниці КК-МВ). Вимірюється тільки активність КК-В, яка складає половину активності КК-МВ.
Принцип методу визначення КК-МВ відображений у формулах (4 - 6).
Досліджуваний матеріал: Сироватка і гепаринизированной або ЕДТА-плазма.
Метод: Кінетика за фактором 8254, (+8414), час затримки 120 сек, час реакції 180 сек. Довжина хвилі 340 (334) нм, оптичний шлях один см, проти бланка по холостий пробі, температура 37 градусів.
Референтні величини:
Ризик ІМ високий при наявності трьох умов:
. ЧК: чоловіки - більше 190 Од/л; жінки - більш 167 Од/л
. КК-МВ: більше 24 Од/л
. Активність КК-МВ становить від шести до 25 відсотків від загальної активності КК [Myocardial infarction redefined ..., 2000].
Якщо є підозри на ГІМ, а всі три умови не виконуються, то це може означати недавній інфаркт. У цьому випадку вимірювання слід повторити через 4:00 зі свіжими зразками [Інструкція до біохімічним наборам SPINREACT, 2010].
2.2.2 Визначення активності амінотрансфераз (АСТ і АЛТ)
Існують дві основні групи методів визначення активності амінотрансфераз: кінцевої точки (колориметрические) і кінетичні (спектрофотометричні). Ми використовували УФ-кінетичний метод вимірювання в ультрафіолеті за рекомендацією МФКХ (IFCC) [Wong, 1996].
Принцип методу: АСТ каталізує оборотний перенесення аміногрупи від аспартату до a-кетоглютарат з утворенням глютамата і оксалоацетата (7). Утворений оксалоацетат редукується в малат малатдегідрогеназа і NADH (8).
Швидкість зниження концентрації NADH, вимірювана фотометрически при 340нм, прямо пропорційна каталітичної активності (концентрації) АСТ, присутньої в пробі.
Досліджуваний матеріал: Сироватка і гепаринизированной плазма.
Метод: Кінетика по фактору (- 1750), час затримки 60 сек, час реакції 180 сек. Довжина хвилі 340 нм, оптичний шлях один см, проти бланка по дистильованій воді або по повітрю, температура 25, 30 або 37 градусів.
Принцип методу: АЛТ каталізує оборотний перенесення аміногрупи від аланіну до a-кетоглютарат з утворенням глютамата і пірувату (9). Утворений піруват редукується в лактат лактатдегідрогенази NADH (10). Швидкість зниження концентрації NADH, вимірювана фотометрически при 340нм, прямо ...
