вного результату. p> Друга помилка - неправильно приготовані фонові пробірки для тест-систем з флуоресцентної детекцией але кінцевій точці. Найчастіше це пов'язано з тим, що співробітник лабораторії забуває їх міняти при появу нової серії реактивів або не робить цього з міркувань економії. Можливо, що одні й ті ж компоненти реакційної суміші навряд чи будуть мати різний рівень флуоресценції, однак у різних серіях реактивів можуть відрізнятися концентрації компонентів і тому висока ймовірність різного рівня флуоресценції. Таким чином, помилка, вплив якої в деяких випадках можна не помітити, в інших може зумовити велика кількість недостовірних результатів.
Ще однією помилкою, пов'язаною з неправильним приготуванням фонових пробірок, є додавання в них полімерази. Це може статися як випадково, так і внаслідок того, що лаборант не до кінця розуміє, чому полімеразу додавати не потрібно. Тут можуть бути два варіанти розвитку подій: якщо в тест-систему не входить внутрішній контроль або в якості негативного контрольного зразка використовується буфер, що не пройшов виділення, і якщо в тест-систему входить внутрішній контроль, який знаходиться під парафіном, та/або негативний зразок проходить стадію виділення. У першому випадку додавання полімерази може істотно не позначитися на результаті, однак і в цьому випадку є ризик контамінації як позитивним, так і внутрішнім контролем. У другому випадку всі негативні значення виявляються недостовірними. Виявити помилку не представляється проблемою, оскільки нормувальні значення виявляються дуже високими, близькими до 10 ', а значення флуоресценції в деяких пробірках істотно нижче 1.
Контамінація.
Проблема контамінації виникає при неправильній організації роботи лабораторії або при необережному поводженні з позитивними зразками. Так, при використанні гель-електрофорезу в якості методу детекції кімната для його проведення обов'язково повинна мати окремий вхід і систему вентиляції. В іншому випадку ймовірність того, що амплікони з відкриваються пробірок будуть потрапляти в інші приміщення, дуже висока. Це може призвести до того, що з часом все бо льше досліджуваних зразків на часто зустрічаються інфекції будуть надаватися позитивними. При цьому на перших етапах такого забруднення негативний контроль може залишатися чистим, оскільки поява хибнопозитивних результатів носить статистичний характер.
У разі флуоресцентної детекції пробірка НЕ відкривається і теоретично вірогідність контамінації близька до нуля, однак можливість її відкриття не виключена. Тому краще, якщо ампліфікація і детекція проводитимуться в окремій кімнаті, тоді в разі непередбаченої ситуації контамінованої виявиться одна кімната.
Ще одна помилка, що приводить до контамінації зразків, пов'язана з неакуратним поводженням як з клінічними пробами, так і з позитивними контрольними зразками і стандартами. Деякі фахівці лабораторії з метою економії при внесенні у велику кількість ...
