пробірок одного і того ж речовини використовують один наконечник. Це можливо, якщо пробірки порожні або їх зміст однаково (підготовка ампліфікаціонних пробірок). Однак, якщо в пробірці знаходиться зразок, як, наприклад, при пробопідготовці, то при внесенні навіть одного і того ж розчину в різні пробірки збільшується ризик перенесення ДНК - так звана крос-контамінація. З метою запобігання крос-контамінації також рекомендується для внесення зразків, потенційно містять ДНК, використовувати наконечники з фільтрами.
Крім цього при неакуратної роботі є ризик внести до пробу інгібітори (наприклад, тальк з рукавичок).
Помилки при інтерпретації результату
Говорячи про помилки при інтерпретації результатів, має сенс розглянути різні способи детекції.
При детекції з використанням гель-електрофорезу є ризик прийняти неспецифічні фрагменти за специфічні, якщо вони близькі за довжині і немає можливості чітко і однозначно порівняти з позитивним контролем і, в ідеалі, з маркером довжин.
У разі порушень правил роботи існує ризик контамінації вже на етапі детекції. Такого роду контамінація відстежується у разі, якщо смуга спостерігається у свідомо негативній пробі, однак вона не відрізняється від контамінації в лабораторії і вимагає повторної перевірки всіх зразків.
Однією з помилок інтерпретації, пов'язаної з використанням методу флуоресцентної детекції по кінцевій точці, є неуважне ставлення до нормувального значенням фонових пробірок і до значенням флуоресценції в негативних пробах. Так, при неправильному зберіганні зонди в фонових пробірках можуть руйнуватися, і нормувальні значення істотно збільшуються (від декількох годин до декількох днів), при цьому значення флуоресценції в зразках виявляються в більшій чи меншій мірі занижені. Головним критерієм достовірності отриманих результатів в даному випадку можуть служити негативні проби. За відсутності розбіжностей між фоновими і ампліфікаціонних пробірками негативні зразки мають значення флуоресценції близькі до одиниці або, в окремих випадках, трохи вище. Якщо значення флуоресценції в одному або декількох зразках або негативному контролі істотно нижче одиниці, з великою часткою ймовірності можна стверджувати, що фонові пробірки НЕ відповідають даним дослідженням, в цьому випадку необхідно їх поміняти.
Крім вищенаведеного прикладу, може трапитися так, що фонова флуоресценція зростає в ампліфікаціонних пробірках, в той час як у фонових пробірках флуоресценція залишається незмінною. Така ситуація може виникнути коли ампліфікаціонних пробірки зберігаються при кімнатній температурі. У цьому випадку буде збільшуватися вміст позитивних результатів з низькими значеннями флуоресценції. Результати при цьому виходять такі ж, як при контамінації в лабораторії, проте в даному випадку все низькі значення флуоресценції будуть приблизно однакові, що ц випадку контамінації зустрічається досить рідко, оскільки малоймовірно, що в усі негативні пробірки по...
