ться LacI.
pMUTIN
термінатор
оператор
MCS
1
t 0
O1
є
2
t 1 t 2 t 0
O1
немає
3
t 0
oid
є
4
t 1 t 2 t 0
oid
немає
В
Рис. 8. Структура векторів pMUTIN. Спільні риси векторів pMUTIN показані на малюнку. Відмінності між векторами pMUTIN вказані в таблиці праворуч від малюнка. Білі бокси є генами експресуються в B. subtilis , чорні бокси - гени експресуються в E. coli . ori - область реплікації ColE1. ApR і EmR, гени резистентності до ампіциліну і еритроміцину відповідно. lacZ, модифікований ген b-галактозидази - ген lacZ c RBS гена spoVG B. subtilis і стоп кодонами в трьох можливих рамках зчитування; P spac , індукований промотор, що містить послідовності розпізнавання РНК-полімеразою фага SPO1 і один з lac операторів - O1 або оператор oid ; lacI , ген репрессора LacI модифікований для конститувною експресії в B. subtilis ; Ter - термінатори: lt0 присутня у всіх векторах; t1t2 (сильні термінатори з rrnB ) у pMUTIN2 і pMUTIN4. Op - оператор LacI між промоторних послідовностями P spac : O1 оператор присутній в pMUTIN1 і pMUTIN2; оператор oid присутня в pMUTIN3 і pMUTIN4. Відмінності між векторами pMUTIN вказані в таблиці праворуч від малюнка.
Досліджуваний ген можна інактивувати в результаті одиночного кросинговеру між вставкою, здійсненої в вектор pMUTIN і геном, локалізованим на бактеріальної хромосомі (мал. 9). Для цього внутрішній фрагмент досліджуваного гена амплифицируют за допомогою ПЛР, клонується в полілінкерамі pMUTIN, і вийшла конструкцію використовується для трансформації клітин B. subtilis . У результаті інтеграції ген переривається і від...
