станні системи Транс-блотTurbo, що дозволяє істотно зменшити час перенесення білків з гелю на мембрану (7хв проти 2:00) .В зв'язуванні комплексу білок-SDS з нітроцелюлозній мембраною беруть участь в основному сили електричної природи, причому дана взаємодія є багатоточковим і призводить до «распластиваніе» білків на поверхні мембрани. Таким чином, після електропереносу ми отримуємо на нітроцелюлозі репліку гелю з білками, розташованими так само, як і в поліакриламідному геле.Еффектівность переносу білків з гелю на мембрану може бути перевірена фарбуванням мембрани барвниками Coomassieblue або Ponceau S. Переважно використовується барвник Ponceau S, який володіє більшою чутливістю і краще розчинний у воді, що спрощує подальшу відмивання і нанесення антитіл.
. Блокування. Блокування неспецифічних зв'язувань досягається інкубацією мембрани в розбавленому розчині білка - зазвичай бичачого сироваткового альбуміну або знежиреного сухого молока з невеликим відсотком детергенту типу Tween 20 або Triton X - 100. Білок з розведеного розчину зв'язується з мембраною в тих місцях, де немає досліджуваного білка. У результаті антитіла при їх додаванні можуть зв'язуватися тільки з специфічними сайтами зв'язування на досліджуваних білках. Блокування дозволяє досягати чистого фону і виключає отримання хибнопозитивних результатів.
. Детекція. Після блокування мембрани 3-х кратно відмивають буфером. Потім досліджувані білки детектируют з використанням антитіл методом «сендвіча»: спочатку білки зв'язуються з первинними (моно- або поліклональними) антитілами, які у свою чергу зв'язуються з вторинними антитілами, кон'югованими з ферментами (пероксидазою хрону або лужною фосфатазою). Візуалізація досліджуваного білка досягається шляхом проведення відповідної біохімічної реакції з утворенням продукту, який визначається колориметричним, хемілюмінесцентним, флюоресцентним методами детекції. Хемілюмінесцентнаядетекція має більш високу чутливість в порівнянні з колориметричним методом. Взаємодія люминола і пероксиду в присутності пероксидази хрону, кон'югованій з вторинними антитілами, призводить до утворення окисленого люминола, який володіє люмінесцентним світінням при 425 нм. Інтенсивність хемілюмінесценції пропорційна кількості досліджуваного білка (антигену). Детекція хемілюмінесценції (як і флуоресценції) здійснюється за допомогою гель-документувала системи ChemiDocMP, яка володіє високим дозволом і чутливістю. Система ChemiDocMP забезпечена CCD камерами високої роздільної здатності та потужною системою охолодження, що дозволяє точно фіксувати нечіткі, розпливчасті смуги. Наявність програмного забезпечення дозволяє проводити якісний і кількісний аналіз отриманих даних у порівнянні зі стандартними білками.
2.3 Аналіз епідеміологічної ситуації
У світі:
Станом на кінець 2011 року заразилися ВІЛ-інфекцією 60000000 осіб, з них:
· 25000000 померли
· 35000000 живуть з ВІЛ-інфекцією.
З 35000000 живуть з ВІЛ-інфекцією частина в живих завдяки прийому антиретровірусної терапії. Необхідні ліки отримують менше половини з 9500000 носіїв, які потребують противірусної терапії. Більше двох третин ВІЛ-інфікованих населяють Африку на південь від пустелі Сахари. Епідемія почалася тут наприкінці 1970-х - початку 1980-х. Центром вважається смуга, що протягнулася від Західної Африки до Індійського океану. Потім ВІЛ перекинувся південніше. За винятком країн Африки найшвидше ВІЛ поширюється сьогодні в Центральній Азії та Східній Європі. З 1999 по 2002 роки кількість інфікованих тут майже потроїлася. Ці регіони стримували епідемію до кінця 1990-х, а потім кількість заражених стало різко збільшуватися - в основному за рахунок ін'єкційних наркоманів. Значно нижче середнього поширеність ВІЛ-інфекції у Східній Азії, Північній Африці та на Близькому Сході. У масштабі всієї Землі епідемія стабілізувалася: чи не зросла частка епідемії щодо всього населення, знижується кількість нових випадків ВІЛ-інфекції (з 3500000 нових випадків у 1997 році до 2700000 в 2007 році).
У Росії:
На 1 січня 2013 року в Росії зафіксовано 719445 ВІЛ-інфікованих, в тому числі дітей до 14-ти років - 6,306 тис. У зв'язку з відсутністю профілактики ВІЛ, за рік число заразилися ВІЛ росіян збільшилася на 69,28 тис .. Показник поширеності ВІЛ-інфекції серед дорослих досяг значення ~ 1,1% .. Від хвороб, пов'язаних з ВІЛ та СНІД в 2006 році померло 19347 осіб, серед них 353 дитини. На 1 грудня 2012 року в Росії зафіксовано 125 тис. Випадків смерті від СПІДа.Около 60% випадків ВІЛ-інфікування серед росіян припадає на 11 з 86 російських регіонів (Іркутська, Саратовська, Калінінградська,
Ленінградська, Московська, Оренбурзька, Самарська, Свердловська і Ульяновськ...
