ть температура, кислотність, концентрація, вид розчинника або третя речовина (фермент, каталізатор, антитіло) на хід реакцій їх зв'язування?
Тому ця система і подібні їй широко використовуються для досліджень функцій окремих білків та інших біохімічних речовин, молекулярного розпізнавання, для досліджень і аналізів в областях імунології, онкології, вірусології, інфекційних захворювань, біотехнології та ін.
На чутливу поверхню ППР сенсора встановлюють спеціальну проточну осередок, який через патрубки приєднується до системи регулювання потоку досліджуваної рідини з використанням перистальтичного насоса і ін'єкційного клапана. Оскільки проточна осередок і патрубки дуже тонкі (для економії дорогих препаратів), всі рідини повинні бути профільтровані крізь 0,2 мкм фільтр і ретельно дегазовані. Вся проточна система повинна регулярно промиватися спеціальними розчинами.
При біохімічних дослідженнях зазвичай проводять підготовчий цикл. У цьому циклі через проточну осередок прокачується спочатку розчин протеїну, який осідає мономолекулярним шаром на поверхню золотий плівки. Потім прокачують розчин тих біохімічних молекул або антитіл, взаємодія яких з молекулами або частками аналіту потрібно вивчити. Вони приєднуються до протеїну і утворюють біорецепторний шар (ліганд). Ця процедура може тривати 1 ... 2 ч. У циклі вимірювань проточна осередок і чутлива поверхню спочатку промиваються кілька хвилин буферним розчином. Потім через осередок прокачується заданий об'єм рідини з досліджуваним аналітом, і починається вимір (фаза ІІ). Частинки аналіту приєднуються до ліганду не відразу. Тому криву ППР доводиться вимірювати багаторазово, щоразу розраховуючи за результатами вимірювань точне положення мінімуму ППР, і будувати графік його залежності від часу. Цей графік прийнято називати сенсограммой raquo ;. Усім цим автоматично керує мікропроцесор.
Як бачимо з малюнка 12, максимальна концентрація иммобилизованного (тобто приєднаного до ліганду) аналіту досягається лише через кілька хвилин. Кінетика наростання зсуву мінімуму ППР відображає кінетику хімічних реакцій приєднання аналіту до ліганду. Стаціонарний стан, яке врешті-решт встановлюється, є результатом динамічної рівноваги між хімічними процесами приєднання і дисоціації (від'єднання) аналіту і залежить як від констант відповідних реакцій, так і від концентрації аналіту, температури розчину, умов перемішування і т.п. Це все можна досліджувати.
У ході наступної фази (ІІІ) інжекція аналіту припиниться, проте прокачування чистої рідини. Процеси приєднання практично припиняються, йдуть лише процеси дисоціації. Хід кривої на цій стадії дозволяє обчислити константи цього процесу. А знаючи їх, за результатами вимірювань у фазі ІІ можна обчислити і константи реакції приєднання. У фазі ІV через осередок прокачується розчин елюента, тобто рідини, яка, різко послаблюючи хімічний зв'язок аналіту з лігандом, поступово вимиває аналіт, практично не впливаючи на ліганд. І починається регенерація біочувствітельной поверхні, в ході якої положення мінімуму ППР повинно повернутися до первинного. Після цього можна починати новий цикл вимірювань хімічного взаємодії ліганда з іншим або з тим же аналітом, але при інших умовах. Практично вдається провести понад 50 різних досліджень з одним і тим же лігандом.
Фірма Biacore AB випускає і вузько спеціалізовані ППР сенсори, як, наприклад, BIACORE Quant, призначений спеціально для визначення вмісту вітамінів.
Значно більш компактний інтелектуальний ППР сенсор SR7000 випускає фірма Reichert Analytical Instruments, Inc. У ньому використовується розходиться світловий пучок і лінійка фотодетекторов, які забезпечують спостереження ППР в межах кутів відбиття від 58,5 до 85.
Для забезпечення рівномірного розподілу інтенсивності вихідного світлового пучка по кутах застосована т.зв. інтегруюча сфера raquo ;. Оптична призма виконана із сапфіра з показником заломлення 1,76. Чутливий елемент на скляній підкладці з показником заломлення 1,51 оптично з'єднаний з призмою через тонкий шар иммерсионной рідини.
Вчені та розробники з лабораторії мікроінструментів і систем університету в Майні (The University of Maine, показали, що розміри ППР сенсора зовсім не обов'язково повинні бути великими, як в BIACORE 3000.
На основі 1 з кремнію сформовано плоске мініатюрне дзеркало 2, яке під дією електростатичних сил може в межах 10-20 обертатися навколо осі, закріпленої на його приводі. У робочому шарі кремнію сформовані також лінійка фотодетекторов 3 з мікросхемами посилення і селекції сигналів і мікросхема управління приводом дзеркала. Над кремнієм сформований шар скла, в якому над дзеркалом 2 і фотодетекторами витравлена ??порожнина, заповнена прозорою рідиною 4. На поверхню скла нанесе...
