го матеріалу і перемішують.
Інкубують 1 хв при 37 С, вимірюють оптичну щільність розчину по відношенню до повітря або воді. Точно через 2 хвилини повторюють вимір, обчислюють середнє зміна оптичної щільності за 1 хв. (~ А/хв)
Розрахунок:
Е/л=* A/хв х F, де F=1770
Нормальні значення: чоловіки до 40 Е/Л
Жінки до 40 Е/л [10]
определеии аланінамінотрансферази кінетичної метод
Принцип методу:
заснований на послідовності ферментативних реакцій:
- аланін + 2 - оксоглутарат АЛТ ~ глутамат + піруват
Піруват + НАДН + Н ЛДГ ~ лактат + НАД +
Швидкість зменшення концентрації НАДН, який має максимум поглинання при 340 нм, пропорційна активності АЛТ і вимірюється фотометрически.
Методика аналізу:
Набір реагентів призначений для ручного визначення і для визначення на автоматичних та напівавтоматичних аналізаторах.
Ручне визначення:
Довжина хвилі 340 нм, температура вимірювань 37 С.
У кювету поміщають 500 мкл робочого реагенту, прогрівають 5 хвилин, потім додають 50 мкл досліджуваного матеріалу і перемішують.
Інкубують 1 хв при 37 С, вимірюють оптичну щільність розчину по відношенню до повітря або воді. Точно через 2 хвилини повторюють вимір, обчислюють середнє зміна оптічемкой щільності за 1 хв. (* А/хв)
Розрахунок:
Е/л=* А/хв х F, де F=1746 Нормальні значення: чоловіки до 42 Е/Л Жінки до 32 Е/л
визначення лужної фосфатази.
Кінетичний метод., N'g 001.006.01-001 1. Буфер 80мл
. Субстрат 20 мл
Кат № 001.006.10-001 1. Буфер 160 мл
. Субстрат40мл
Принцип методу
Оптимізований стандартний метод відповідно до рекомендацій IFCC.
ЩФ п-нітрофенілфосфат + н.о ~ фосфат + п-нитрофенол
Склад набору
. Буфер:
Буфер АМР (рН 10,4) 435ммоль/л
Магнію ацетат 2,5 ммоль/л
. Субстрат:
п-нітрофенілфосфат 60 ммоль/л
Підготовка і стійкість реагентів
Метод роботи з індивідуальними реагентами. Реагенти готові до застосування. Реагенти, навіть після розтину флаконів, можуть зберігатися при 2-8 О? до зазначеного терміну придатності. Слід уникати забруднення реагентів!
Метод роботи з робочим реагентом.
Для приготування робочого реагенту слід:
Обережно змішати реагент 1 (Буферний розчин) і 2 (Субстрат) у співвідношенні 4: l. Робочий реагент стійкий 4 тижні при 2-8 0 С або; 5 днів при 15 · 25С. Робочий реагент слід зберігати в захищеному від світла місці.
Досліджуваний матеріал
Сироватка, гепаринизированной плазма. Не використовувати гемолізовані проби!
Падіння активності в сироватці протягом 7 днів: 0% при 4 ° С, 10% при 20-25 0 с.
Схема проведення аналізу
Довжина хвилі: Hg 405 нм (400 - 420 нм)
Довжина оптичного шляху: 1 см Температура: 30 О?, 37 ° С
Вимірювання: проти повітря (збільшення поглинання).
Реагенти та кювети прогріти до необхідної температури. Температуру протягом аналізу підтримувати постійною (± 0.5с).
Таблиця 16 Схема піпетування *
У кювети піпетіровать25С, 30С 37СПроба 20мклБуферний раствор1000мклПеремешать, інкубувати 1 хвилин при необхідній температуреСубстрат250мклПеремешать, через 1мінуту виміряти поглинання і одночасно включити секундомір. Точно через 1,2,3 хв повторити вимірювання.
Таблиця 17 Метод роботи з робочим реагентом
У кювети піпетіровать25С, 30С 37СПроба20мклРабочій раствор1000мклПеремешать, через 1мінуту виміряти поглинання і одночасно включити секундомір. Точно через 1,2,3 хв повторити вимірювання.
При використанні мікрокювет обсяги можна зменшити вдвічі
Розрахунок активності
Розрахувати середню величину зміни поглинання за 1 хвилину (* А/хв) і підставити її в формулу розрахунку активності. Активність лужної фосфатази розраховується за такими формулами:
